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斜拉板桩码头结构与土相互作用研究
| 论文题名： | 斜拉板桩码头结构与土相互作用研究 |
| 关键词： | 斜拉板桩结构;离心模型;楔形土体;土压力;弯矩;有限元计算 |
| 摘要： | 目的采用不同培养基和饲养层培养人胚胎干细胞系H1，探讨适合细胞增殖的最佳条件并分析其基本生物学特性，同时探讨提高细胞复苏存活率方法，并探讨H1是否具有分化为生殖细胞的潜能。方法以人胚胎干细胞系H1为研究对象，分别采用小鼠胚胎成纤维细胞MEF(Mouse embryonic fibroblast，MEF)和人胚胎来源的成纤维细胞系HFF-1(Human fetal fibroblast，HFF-1)作为饲养层，培养基分别以DMEM/F12和Knock-out<'TM> DMEM作为基础培养基配制H1培养基。实验共分为四组：Ⅰ MEF+DMEM/F12，Ⅱ MEF4-K-DMEM，ⅢHFF4-DMEM/F12，ⅣHFF+K-DMEM。细胞复苏采用H1培养基中添加存活因子BDNF、NT3和NT4(统称NTs)，成为复苏条件培养基。H1基本生物学特性检测采用免疫荧光、RT-PCR、碱性磷酸酶和核型分析，同时检测未分化H1的生殖细胞分化相关基因的基本表达模式，分别以人正常睾丸组织和人胚胎成纤维细胞株HFF-l作为阳性和阴性对照组织。结果Ⅰ组中H1克隆形态规则，不发生分化，增殖速度快；而Ⅱ组细胞克隆传代后第四天发生分化：Ⅲ组和Ⅳ组细胞传代后第三关就显示出分化趋势，克隆变扁。采用复苏条件培养液复苏细胞后，与常规复苏方法相比，克隆存活率明显提高。Ⅰ组中H1细胞保持正常核型和基本生物学特性。未分化H1表达减数分裂前生殖细胞标志基因STELLAR，DAZL，FRAGILISPUM1，PUM2和GDF3；不表达原始生殖细胞标志BLIMP-1、减数分裂特异标志SCP1、减数分裂启动标志STRA8以及生殖细胞分化后期标志VASA。结论不同的hES细胞系最佳培养条件是不同的；Ⅰ组培养条件适合H1细胞增殖，而HFF-1不能有效维持H1细胞生长；复苏细胞可添加存活因子以提高克隆存活率。未分化H1细胞表达生殖细胞减数分裂前标志基因，但不表达分化后期标志基因，提示人胚胎干细胞本质上是一种异质性细胞群，与原始生殖细胞PGCs(Primordialgerm cells)共享一些基因，自身就具备生殖细胞分化程序，但不启动减数分裂程序。BLIMP-1在H1的阴性表达可能使其成为区分未分化hES与PGCs的特异性标志基因，为鉴定ES来源的生殖细胞提供一个重要标志。 |
| 作者： | 李士林 |
| 专业： | 岩土工程 |
| 导师： | 徐光明 |
| 授予学位： | 硕士 |
| 授予学位单位： | 南京水利科学研究院 |
| 学位年度： | 2007 |
| 正文语种： | 中文 |
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