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原文传递内源性大麻素生物标志组合物及其检测方法和应用

专利名称：	内源性大麻素生物标志组合物及其检测方法和应用
摘要：	本发明涉及一种内源性大麻素生物标志组合物及检测方法，该生物标志组合物包括以下组分：AEA、OEA、LEA、PEA或SEA，其检测方法包括以下步骤：(1)提供样品，所述样品包括来自于检测对象的血液或组织；(2)对样品进行前处理，得到待检测样本；(3)对待检测样本采用超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱系统进行分离和分析检测，获得所述样品中AEA、OEA、LEA、PEA或SEA含量。本发明检测方法无需进行衍生化处理，减少基质效应，提高检测准确度，能够实现生物样品中的痕量检测，提高检测的灵敏度，通过一次操作即可实现多种内源性大麻素的定性和定量检测，分析时间短，检测结果准确，重复性强，具有可预期的临床应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海中医药大学
发明人：	胡诚;潘凌云;刘王振祖;钱晓婧;张家祺
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-07T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-21T00:00:00+0800
申请号：	CN202310985003.4
公开号：	CN117092238A
代理机构：	上海佰特专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	吕玲玉
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/04;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/04
申请人地址：	201203 上海市浦东新区蔡伦路1200号
主权项：	1.一种内源性大麻素生物标志组合物，其特征在于，该生物标志组合物包括以下组分中的至少三种：AEA、OEA、LEA、PEA或SEA。 2.如权利要求1所述的一种内源性大麻素生物标志组合物在制备非酒精性脂肪肝鉴别诊断试剂的应用。 3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，检测待测组织样品中的AEA、OEA、LEA、PEA和SEA的含量，并与标准值比较，判断脂肪肝患病状况。 4.如权利要求1所述的一种内源性大麻素生物标志组合物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)提供样品，所述样品包括来自于检测对象的血液或组织； (2)对步骤(1)中的样品进行前处理，得到待检测样本； (3)对步骤(2)待检测样本采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱系统进行分离和分析检测，获得所述样品中AEA、OEA、LEA、PEA或SEA含量。 5.根据权利要求4所述的一种内源性大麻素生物标志组合物的检测方法，其特征在于，步骤(2)通过液液萃取法对样品进行前处理，具体操作为，将样品与溶剂充分混合，离心、取上层溶液浓缩，吹干后加入溶液中保存待测。 6.根据权利要求5所述的一种内源性大麻素生物标志组合物的检测方法，其特征在于，所述溶剂包括甲基叔丁基醚、甲醇和纯水，所述溶液为乙腈水溶液。 7.根据权利要求5所述的一种内源性大麻素生物标志组合物的检测方法，其特征在于，样品离心时间为5～15min，转速为3000～6000r/min。 8.根据权利要求5所述的一种内源性大麻素生物标志组合物的检测方法，其特征在于，步骤(3)采用超高效液相色谱仪，使用C18色谱柱(2.1mm×10mm，1.7μm)，进样体积为1μL～10μL，柱温35℃～45℃，采用梯度洗脱法。 9.根据权利要求8所述的一种内源性大麻素生物标志组合物的检测方法，其特征在于，所述的梯度洗脱法，以0.01％～0.1％甲酸乙腈为有机相，以0.01％～0.1％甲酸水为水相，梯度洗脱程序具体为： (1)体积比例为16％～24％的甲酸乙腈等度洗脱0.5～1.5min； (2)甲酸乙腈体积比例从16％～24％匀速增至50％～60％，梯度洗脱0.5～1.5min； (3)甲酸乙腈体积比例从50％～60％匀速增至60％～70％，梯度洗脱8.0～9.0min； (4)甲酸乙腈体积比例从60％～70％匀速增至85％～95％，梯度洗脱0.5～1.0min； (5)甲酸乙腈体积从85％～95％瞬时切换至16％～24％后等度洗脱1.0～2.0min。 10.根据权利要求5所述的一种内源性大麻素生物标志组合物的检测方法，其特征在于，步骤(3)采用三重四极杆串联质谱仪，质谱条件为：离子源为电喷雾离子源(ESI)，扫描模式为正、负离子模式；离子源喷雾电压：4.5kV～5.5kV；离子源气帘气：206.8～241.3kPa；碰撞气：41.4～48.3kPa；离子源温度：450℃～600℃；雾化气：379.2～413.7kPa；辅助气：379.2～413.7kPa。