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原文传递一种基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法及其应用

专利名称：	一种基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法及其应用
摘要：	本发明公开了一种基于UPLC‑MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法及其应用，包括如下步骤：S1,绘制标准曲线；S2,待测含药血浆样品进行UPLC‑MS/MS分析，分析结果带入绘制的阿司匹林、水杨酸的标准曲线方程，计算得到待测血浆样品中阿司匹林、水杨酸的浓度。本发明方法血浆用量仅为100μL，并解决了血浆中待测物阿司匹林不稳定问题。本发明的检测方法选择性好、灵敏度和准确度高，可实现高通量检测，适用于临床样品中阿司匹林和水杨酸的浓度测定。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	四川省药品检验研究院(四川省医疗器械检测中心)
发明人：	朱恒怡;唐维英;吴强;杨姗姗;魏伯平;赵代国
专利状态：	有效
申请日期：	2023-07-31T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-14T00:00:00+0800
申请号：	CN202310950154.6
公开号：	CN117054542A
代理机构：	成都蓉创智汇知识产权代理有限公司
代理人：	谭新民
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
申请人地址：	610000 四川省成都市高新西区新文路8号
主权项：	1.一种基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，包括如下步骤： S1,绘制标准曲线： S01,配制阿司匹林及水杨酸的储备液和标准曲线工作溶液； S02,配制阿司匹林-氘4及水杨酸-氘4的内标储备液和内标工作液； S03,配制标准曲线血浆样品； S04,分别取S03制备的标准曲线血浆样品，经液液萃取后，进样UPLC-MS/MS进行分析，记录标准曲线血浆样品中阿司匹林、水杨酸、内标阿司匹林-氘4、内标水杨酸-氘4的色谱图、色谱峰面积；然后分别以标准曲线血浆样品溶液中阿司匹林、水杨酸浓度为横坐标，阿司匹林与内标阿司匹林-氘4、水杨酸与内标水杨酸-氘4的色谱峰面积比为纵坐标，采用最小二乘法进行回归运算，分别绘制得到阿司匹林、水杨酸标准曲线方程； S2,取待测含药血浆样品，经液液萃取后，进样UPLC-MS/MS进行分析，记录待测含药血浆样品中阿司匹林、水杨酸、内标阿司匹林-氘4、内标水杨酸-氘4的色谱图、色谱峰面积；接着分别将待测含药血浆样品中阿司匹林与内标阿司匹林-氘4、水杨酸与内标水杨酸-氘4的色谱峰面积比带入绘制的阿司匹林、水杨酸的标准曲线方程，计算得到待测血浆样品中阿司匹林、水杨酸的浓度；其中待测含药血浆样品通过以下方式制取：采用含K2EDTA抗凝剂和氟化钠添加剂的真空采血管采集受试者服药后不同采血时间点的上肢静脉全血，上肢静脉全血离心后，在离心后的血浆中加入乙酸水溶液。 2.根据权利要求1所述的基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，其特征在于，该基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法用于检测临床试验受试者服用铝镁匹林片(Ⅱ)后血浆中阿司匹林和水杨酸浓度。 3.根据权利要求1或2任一所述的基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，其特征在于，所述储备液的配制溶剂为1％乙酸乙腈溶液，工作液的配制溶剂为含4％乙酸的50％乙腈水溶液；所述血浆中添加的乙酸水溶液为19.42％乙酸水溶液，加入体积为血浆体积的1％；和/或所述待测含药血浆样品制取前及制取后均在冰浴中暂存；和/或上肢静脉全血样品及上肢静脉全血样品离心后的血浆样品需在冰浴条件下暂存，直至放入超低温冰箱。 4.根据权利要求1-3任一所述的基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，其特征在于，S03中，配制标准曲线血浆样品时的空白血浆采用如下方式获取：符合伦理要求的受试者在采集空白全血的前2天不得食用富含水杨酸的食物，禁止吸烟，采集空白血浆置于含K2EDTA、氟化钠的采血管中，轻柔颠倒多次混匀后离心，离心条件为2℃～8℃，以1700g的离心力离心10min，离心之后取上层空白血浆(含K2EDTA、氟化钠)，即得；优选地，富含水杨酸的食物为食用茶、咖啡、含咖啡饮料、含醇类饮料、杏仁果、苹果、杏果、蓝莓、黑莓、小红莓、薄荷、樱桃、葡萄、桃、橘子、橙、胡柚、柠檬、梅、番茄、黄瓜、火锅、西柚、葡萄柚、芒果、葡萄汁、中药材。 5.根据权利要求1-4任一所述的基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，其特征在于，所述UPLC-MS/MS分析中，色谱条件为：色谱柱：Shim-pack GIST-HP C18，3μm，2.1×100mm；流速：0.4mL/min；柱温：30℃；流动相：A相：含0.16％乙酸0.04％甲酸和0.1mmol/L甲酸铵的水溶液，B相：含0.016％乙酸0.004％甲酸和0.01mmol/L甲酸铵的90％乙腈水溶液；梯度洗脱过程如下表1；表1流动相梯度洗脱条件其中，每个样品采集时间为3.8分钟，进样体积为10μL。 6.根据权利要求1-5任一所述的基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法，其特征在于，所述UPLC-MS/MS分析中，质谱条件如下表2：表2阿司匹林、水杨酸和内标阿司匹林-氘4、水杨酸-氘4的质谱参数名称 Q1 Q3 DP(V) CE(V) EP(V) CXP(V) ASPL 179.0 137.0 -10 -10 -10 -10 ASPL-氘4 182.9 141.1 -10 -11 -10 -16 SYS 137.0 65.1 -20 -16 -10 -10 SYS-氘4 141.0 69.0 -25 -17 -10 -10 其中，ASPL指阿司匹林，SYS指水杨酸。 7.权利要求1-6任一所述基于UPLC-MS/MS检测人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的方法应用于BUFFERIN的仿制药研发生产中。 8.一种BUFFERIN的仿制药研发中用于制备标准曲线样品和质控样品及其它未做特殊说明的方法学验证样品的健康人空白血浆采集方法，其特征在于，所述采集方法通过以下方式获取：符合伦理要求的健康人在采集空白全血的前2天不得食用富含水杨酸的食物，禁止吸烟，采集空白全血置于含K2EDTA、氟化钠的采血管中，轻柔颠倒多次混匀后离心，离心条件为2℃～8℃，以1700g的离心力离心10min，离心之后取上层空白血浆，即得；优选地，富含水杨酸的食物为食用茶、咖啡、含咖啡饮料、含醇类饮料、杏仁果、苹果、杏果、蓝莓、黑莓、小红莓、薄荷、樱桃、葡萄、桃、橘子、橙、胡柚、柠檬、梅、番茄、黄瓜、火锅、西柚、葡萄柚、芒果、葡萄汁、中药材。 9.一种BUFFERIN的仿制药研发中受试者含药血浆采集方法，其特征在于，所述采集方法通过以下方式获取：采用含K2EDTA抗凝剂和氟化钠添加剂的真空采血管采集受试者服药前和服药后不同采血时间点的上肢静脉全血，上肢静脉全血离心后，在离心后的血浆中加入乙酸水溶液；全血样品及离心后的血浆样品需在冰浴条件下暂存。 10.根据权利要求9所述的BUFFERIN的仿制药研发中受试者含药血浆采集方法，其特征在于，所述乙酸水溶液为19.42％乙酸水溶液，加入体积为血浆体积的1％；和/或所述待测含药血浆样品制取前及制取后均在冰浴中暂存，直至放入超低温冰箱。