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原文传递用于预测静脉内平滑肌瘤进展的生物标志物及其应用

专利名称：	用于预测静脉内平滑肌瘤进展的生物标志物及其应用
摘要：	本发明涉及生物检测技术领域，公开了用于预测静脉内平滑肌瘤进展的生物标志物及其应用。具体为采用血清蛋白组学技术以及数据统计分析技术得到用于静脉内平滑肌瘤进展预测的生物标记物，所述生物标志物为【IGL c601_light_IGLV2‑14_IGLJ3(Fragment)】、【IG c843_heavy_IGHV3‑49_IGHD3‑3_IGHJ6(Fragment)】、【IG c678_heavy_IGHV3‑23_IGHD1‑14_IGHJ4(Fragment)】、【IGH+IGL c492_heavy_IGHV3‑20_IGHD3‑22_IGHJ4(Fragment)】中的任意一种或多种的组合。将其用于预测静脉内平滑肌瘤进展时，可操作性强，准确性高，通过取血就能实现诊断和预测，快速便捷，属于无创新方法，有利于静脉内平滑肌瘤的早诊治以及肿瘤复发的监测，具有良好的临床价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国医学科学院北京协和医院
发明人：	冯鹏辉;葛志通;张紫娟;毕谦;尚萌萌;闵婕;周平;肖滢;陈蓉;李建初
专利状态：	有效
申请日期：	2023-06-12T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-07T00:00:00+0800
申请号：	CN202310690937.5
公开号：	CN117007810A
代理机构：	北京慧尚知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	郑德龙
分类号：	G01N33/68;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/88;G;G01;G01N;G01N33;G01N30;G01N33/68;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/88
申请人地址：	100005 北京市东城区帅府园一号
主权项：	1.用于预测静脉内平滑肌瘤进展的生物标志物，其特征在于：所述生物标志物为【IGLc601_light_IGLV2-14_IGLJ3(Fragment)】、【IG c843_heavy_IGHV3-49_IGHD3-3_IGHJ6(Fragment)】、【IG c678_heavy_IGHV3-23_IGHD1-14_IGHJ4(Fragment)】、【IGH+IGL c492_heavy_IGHV3-20_IGHD3-22_IGHJ4(Fragment)】中的任意一种或多种的组合。 2.根据权利要求1所述的用于预测静脉内平滑肌瘤进展的生物标志物，其特征在于：所述生物标记物【IGL c601_light_IGLV2-14_IGLJ3(Fragment)】的表达量随着静脉内平滑肌瘤的进展总体趋势升高，【IG c843_heavy_IGHV3-49_IGHD3-3_IGHJ6(Fragment)】、【IGc678_heavy_IGHV3-23_IGHD1-14_IGHJ4(Fragment)】和【IGH+IGL c492_heavy_IGHV3-20_IGHD3-22_IGHJ4(Fragment)】的表达量随着静脉内平滑肌瘤的进展总体趋势降低。 3.根据权利要求1或2任一项所述的用于预测静脉内平滑肌瘤进展的生物标志物，其特征在于：所述静脉内平滑肌瘤的进展前后依次包括4个阶段，分别为完全健康、健康有子宫肌瘤、静脉内平滑肌瘤术后未复发、静脉内平滑肌瘤术后复发。 4.生物标志物在制备用于预测静脉内平滑肌瘤进展试剂盒中的应用，其特征在于，所述生物标志物为【IGL c601_light_IGLV2-14_IGLJ3(Fragment)】、【IG c843_heavy_IGHV3-49_IGHD3-3_IGHJ6(Fragment)】、【IG c678_heavy_IGHV3-23_IGHD1-14_IGHJ4(Fragment)】、【IGH+IGL c492_heavy_IGHV3-20_IGHD3-22_IGHJ4(Fragment)】中任意一种或多种的组合。 5.用于预测静脉内平滑肌瘤进展的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测【IGLc601_light_IGLV2-14_IGLJ3(Fragment)】、【IG c843_heavy_IGHV3-49_IGHD3-3_IGHJ6(Fragment)】、【IG c678_heavy_IGHV3-23_IGHD1-14_IGHJ4(Fragment)】、【IGH+IGL c492_heavy_IGHV3-20_IGHD3-22_IGHJ4(Fragment)】表达量的试剂。 6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述用来检测【IGL c601_light_IGLV2-14_IGLJ3(Fragment)】、【IG c843_heavy_IGHV3-49_IGHD3-3_IGHJ6(Fragment)】、【IGc678_heavy_IGHV3-23_IGHD1-14_IGHJ4(Fragment)】、【IGH+IGL c492_heavy_IGHV3-20_IGHD3-22_IGHJ4(Fragment)】表达量的样本为血清。 7.用于预测静脉内平滑肌瘤进展的生物标志物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、分别收集静脉内平滑肌瘤术后无复发患者、静脉内平滑肌瘤术后复发患者、完全健康对照者和健康有子宫肌瘤对照者的血清；步骤2、通过基于数据独立采集质谱的蛋白质组学进行蛋白检测；步骤3、利用加权基因共表达网络分析、套索惩罚Cox回归分析、趋势聚类和广义线性回归模型筛选参与IVL进展的核心蛋白。 8.根据权利要求7所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤2通过基于数据独立采集质谱的蛋白质组学进行蛋白检测的具体过程为：步骤2.1、使用多重亲和去除系统色谱柱分离血清池中最丰富的蛋白质，分别分离出高丰度蛋白和低丰度蛋白，然后采用5kDa超滤管对高、低丰度组分进行脱盐浓缩；再加入SDT缓冲液，煮沸15分钟；然后在14000g下离心20分钟，使用BCA法定量；步骤2.2、对高丰度蛋白和低丰度蛋白进行消化，具体为：使用UA缓冲液对200μg蛋白质进行重复超滤去除洗涤剂、DTT和其他低分子量成分；然后加入100μL碘乙酰胺阻断还原性半胱氨酸残基；再先后用100μL UA缓冲液和NH4HCO3缓冲液漂洗滤池；最后，蛋白质悬浮液被消化以进一步脱盐和浓缩；步骤2.3、使用高pH值反相肽分离试剂盒从低丰度组分中分离消化池肽；添加iRT试剂盒以纠正iRT标准肽与样品肽体积比为1：3的运行之间的相对保留时间差异；步骤2.4、使用质谱仪分析所有用于数据依赖采集文库生成的分数；步骤2.5、通过DIA模式下的液相色谱-串联质谱进一步检测多肽。 9.根据权利要求8所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤2.4中MS检测方法为正离子，扫描范围为300-1800m/z，MS1扫描分辨率为60000，扫描频率为200m/z，自动增益控制目标为3e6，最大IT为25ms，动态排除为30.0s；MS2扫描分辨率为15000，自动增益控制目标为5e4，最大IT为25ms，归一化碰撞能量为30eV；所述步骤2.5中每个DIA周期包括一个完整的MS-SIM扫描和30个DIA扫描，SIM全扫描分辨率为120000；自动增益控制目标为3e6；最大IT50ms；配置模式；DIA扫描的分辨率设置为15000；自动增益控制目标目标为3e6；Max ITauto；归一化碰撞能为30eV。 10.根据权利要求8所述的筛选方法，其特征在于，在MS研究开始时和整个蛋白检测过程中每六次注射一次质量控制样品后注入DIA模式，从而确保检测系统的稳定性及实验数据的可靠性。
所属类别：	发明专利