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原文传递一种检测尿液中人类免疫缺陷病毒HIV-1和HIV-2抗体的试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种检测尿液中人类免疫缺陷病毒HIV-1和HIV-2抗体的试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种检测尿液中人类免疫缺陷病毒HIV‑1和HIV‑2抗体的试剂盒及其制备方法。包括试纸条，所述试纸条包括PVC底板、滤样纸、乳胶+胶体金标记垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述乳胶+胶体金标记垫上包被有乳胶颗粒标记的SPA蛋白和胶体金颗粒标记的抗人IgG，所述免疫硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线混合包被有gp41重组抗原、gp36重组抗原和gp120重组抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。本发明创新性的采用尿液为样本，乳胶法与胶体金法两者结合检测尿液中的HIV抗体，避免了血检带来的感染和创伤，灵敏度比胶体金法更强，且能够同时检测HIV‑1和HIV‑2抗体，不会出现漏检。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	珠海市慧康生物科技有限公司
发明人：	梁芳芳;张连海;黄春英;李燕平;黄品豪;梁毅;黄柯豪
专利状态：	有效
申请日期：	2022-12-06T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-14T00:00:00+0800
申请号：	CN202211558516.9
公开号：	CN117054646A
代理机构：	深圳市深联知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	黄立强
分类号：	G01N33/569;G01N33/577;G01N33/68;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/68
申请人地址：	519075 广东省深圳市香洲区景晖路3号33栋206房
主权项：	1.一种检测尿液中人类免疫缺陷病毒HIV-1和HIV-2抗体的试剂盒，包括试纸条，所述试纸条包括PVC底板、滤样纸、乳胶+胶体金标记垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述滤样纸、乳胶+胶体金标记垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述PVC底板上，其特征在于，所述乳胶+胶体金标记垫上包被有乳胶颗粒标记的SPA蛋白和胶体金颗粒标记的抗人IgG，所述免疫硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线混合包被有gp41重组抗原、gp36重组抗原和gp120重组抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。 2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述乳胶颗粒为粒径为200-300nm的聚苯乙烯颗粒，所述胶体金颗粒的粒径为30-100nm。 3.一种试剂盒的制备方法，其特征在于，所述试剂盒为如权利要求1～2任一项所述的试剂盒，包括以下步骤： 1)乳胶颗粒标记的SPA蛋白的制备：用羧基化的乳胶颗粒标记SPA蛋白，获得乳胶颗粒标记的SPA蛋白； 2)胶体金颗粒标记的抗人IgG的制备：用胶体金颗粒标记抗人IgG，获得胶体金颗粒标记的抗人IgG； 3)乳胶+胶体金标记垫的制备：用步骤1)获得的乳胶颗粒标记的SPA蛋白和步骤2)获得的胶体金颗粒标记的抗人IgG包被聚酯膜，获得乳胶+胶体金标记垫； 4)免疫硝酸纤维素膜的制备：将混合的gp41重组抗原、gp36重组抗原、gp120重组抗原喷在硝酸纤维素膜上形成检测线，将羊抗鼠IgG多克隆抗体喷在硝酸纤维素膜上形成质控线，烘干备用，制得免疫硝酸纤维素膜； 5)将滤样纸、乳胶+胶体金标记垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴在PVC底板上，切裁制得试纸条。 4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)乳胶颗粒标记的SPA蛋白的制备具体包括以下步骤： a.取体积为n的羧基化的聚苯乙烯颗粒，用体积为2n～3n的MES缓冲溶液多次冲洗、离心、弃上清，获得羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀； b.用体积为1n～1.5n的10mM pH7.4的磷酸缓冲溶液悬浮步骤a获得的羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀，并加入体积为1n～1.5n的水溶性1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，室温下搅拌20～30分钟，最后用体积为2n～3n的10mM pH8.0的硼酸缓冲溶液多次冲洗、离心、弃上清，获得待标记物； c.向步骤b获得的所述待标记物中加入体积为2n～3n的10mM pH 7.0的硼酸缓冲液制成乳胶悬液，并向所述乳胶悬液中加入SPA蛋白； d.室温下搅拌2小时，加入终止剂终止反应，获得乳胶颗粒标记的SPA蛋白。 5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a中羧基化的聚苯乙烯颗粒的浓度为6～14w/v％，所述步骤a中MES缓冲溶液为50mM pH 6.0的含0.01％SDS的MES缓冲溶液，所述步骤b中水溶性1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的浓度为7～9mg/ml。 6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤c中乳胶悬液中羧基化的聚苯乙烯颗粒偶联SPA蛋白的量为0.4mg SPA蛋白/10mg聚苯乙烯颗粒。 7.权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤d中加入的终止剂为50mM pH 8.2的含0.2w/v％酪蛋白钠盐的Tris-HCl缓冲液。 8.权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤d中加入终止剂反应后按照5ul/ml加入10％氯化钠溶液后混匀。 9.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中乳胶+胶体金标记垫的制备具体包括以下步骤： A.用乳胶缓冲液稀释乳胶颗粒标记的SPA蛋白，获得0.3～0.5w/v％的乳胶颗粒标记的SPA蛋白； B.用胶体金缓冲液稀释胶体金颗粒标记的抗人IgG，获得10％的胶体金颗粒标记的抗人IgG； C.用步骤A制备好的乳胶颗粒标记的SPA蛋白和步骤B制备好的胶体金颗粒标记的抗人IgG喷涂聚酯膜，干燥，制得乳胶+胶体金标记垫。 10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述步骤A中的乳胶缓冲液和B中的胶体金缓冲液均包括8～12v％1.0M Tris液、0.25～0.35w/v％聚乙二醇20000、0.18～0.20w/v％牛血清白、0.15～0.25w/v％酪蛋白钠盐、0.3～0.5w/v％海藻糖和0.02～0.08w/v％Proclin-300，用盐酸调节pH至6.0～8.0，余量为水。
所属类别：	发明专利