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原文传递一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒

专利名称：	一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒
摘要：	本发明涉及一种不仅灵敏度高，而且误差小，同时特异性定量检测体液中的Gd‑lgA1含量，从而对IgAN的临床诊治带来便利的一种Gd‑IgA1化学发光定量测定试剂盒，包括分别配制的磁性微粒试剂、酶结合物试剂、校准品、质控品、底物溶液和清洗液且磁性微粒试剂、酶结合物试剂、校准品、质控品、底物溶液和清洗液独立的置于包装容器内；磁性微粒试剂由Gd‑IgA1捕获抗体与磁性微粒偶联制成，Gd‑IgA1捕获抗体在交联缓冲液中通过化学交联剂偶联在磁性微粒的表面；酶结合物试剂由Gd‑IgA1检测抗体与碱性磷酸酶偶联制成，Gd‑IgA1检测抗体在交联缓冲液中通过化学交联剂与碱性磷酸酶偶联。优点：一种Gd‑IgA1化学发光定量测定试剂盒具有检测灵敏度高，检测误差小，能够特异性定量检测体液中的Gd‑lgA1含量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	杭州康知生物科技有限公司
发明人：	张乐之;吴敏华;陈学军;唐小利
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-07T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202310982989.X
公开号：	CN117031012A
代理机构：	杭州仁杰专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	张俊
分类号：	G01N33/543;G01N33/535;G01N21/76;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/76
申请人地址：	311199 浙江省杭州市临平区余杭经济开发区新颜路22号201G
主权项：	1.一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，包括分别配制的磁性微粒试剂、酶结合物试剂、校准品、质控品、底物溶液和清洗液且磁性微粒试剂、酶结合物试剂、校准品、质控品、底物溶液和清洗液独立的置于包装容器内；所述磁性微粒试剂由Gd-IgA1捕获抗体与磁性微粒偶联制成，所述Gd-IgA1捕获抗体在交联缓冲液中通过化学交联剂偶联在磁性微粒的表面；所述酶结合物试剂由Gd-IgA1检测抗体与碱性磷酸酶偶联制成，所述Gd-IgA1检测抗体在交联缓冲液中通过化学交联剂与碱性磷酸酶偶联。 2.根据权利要求1所述的一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述化学交联剂为1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯中的至少一种或两种以上混合物；所述交联缓冲液为不含氨基的MES缓冲液、PBS缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液中的一种，且交联缓冲液的pH值为5.0-8.0。 3.根据权利要求1所述的一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述磁性微粒试剂通过以下方法制得：（1）将含有羧基的磁性微粒加入到50mmol-200mmol的交联缓冲液中且交联缓冲液的pH值为5.0-8.0，使磁性微粒的浓度为0.1%-2.0%，之后加入浓度为0.02%-0.1%的EDC和浓度为0.05%-0.2%的NHS，并在室温下搅拌10分钟-15分钟，之后将其静置于磁分离器1分钟-3分钟，之后弃去上清并用交联缓冲液重悬，重悬后得到浓度为0.05%-0.5%的活化的磁性微粒溶液；（2）取Gd-IgA1捕获抗体，加入到活化的磁性微粒溶液中，且加入的Gd-IgA1捕获抗体与磁性微粒的质量比为0.5-2.0mg∶10mg；（3）将磁性微粒和Gd-IgA1捕获抗体充分混匀，室温孵育反应2小时-4小时，之后加入1%-5%的牛血清白蛋白溶液，室温孵育反应1小时-2小时，之后将其静置于磁分离器1分钟-3分钟，之后弃去上清并用磁性微粒保存液清洗一遍，再用磁性微粒保存液重悬保存，之后用稀释液稀释至工作浓度，即为磁性微粒试剂。 4.根据权利要求1所述的一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述酶结合物试剂通过以下方法制得：（1）将碱性磷酸酶用50mmol-200mmol的交联缓冲液溶解且交联缓冲液的pH值为5.0-8.0，之后加入SMCC并进行混匀，所述混匀过程的温度保持在25℃且混匀时间为20min-60min，之后用30kD超滤管去盐2次-3次，最终用交联缓冲液复溶；（2）将Gd-IgA1检测抗体用50mmol-200mmol的交联缓冲液溶解且交联缓冲液的pH值为5.0-8.0，之后加入Traut’s Reagent并进行混匀，所述混匀过程的温度保持在25℃且混匀时间为20min-60min，之后用100kD超滤管去盐2次-3次，最终用交联缓冲液复溶；（3）将2个反应液混溶，混匀后在2℃-8℃温度下反应16-18小时，之后加入保存液，即为酶结合物储备液，之后用稀释液稀释至工作浓度，即得酶结合物试剂。 5.根据权利要求1所述的一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述校准品通过以下方法制得：取1.0ug的Gd-IgA1蛋白，加入到1.0ml的稀释液中，配制成浓度为1000ug/L的Gd-IgA1蛋白溶液，作为校准品S7；之后再将校准品S7用稀释液梯度稀释成浓度为500ug/L的校准品S6、浓度为250ug/L的校准品S5、浓度为125ug/L的校准品S4、浓度为62.5ug/L的校准品S3、浓度为31.25ug/L的校准品S2、浓度为15.625ug/L的校准品S1，以稀释液作为0浓度的校准品S0。 6.根据权利要求1所述的一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述质控品通过以下方法制得：取0.5ug的Gd-IgA1蛋白，加入到1.0ml的稀释液中，配制成浓度为500ug/L的Gd-IgA1蛋白溶液，作为质控品C1；之后再将质控品C1用稀释液梯度稀释成浓度为200ug/L的质控品C2、浓度为50ug/L的质控品C3。 7.根据权利要求3或4或5或6所述的一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述稀释液为添加有牛血清白蛋白、Tween-20和Proclin300的PBS缓冲液，所述PBS缓冲液的浓度为10-100mM且PBS缓冲液的的pH为6.0-8.0，所述牛血清白蛋白的含量占稀释液总质量的0.5-1.0%，所述Tween-20的含量占稀释液总质量的0.02-0.1%，所述Proclin300的含量占稀释液总质量的0.02-0.1%。 8.根据权利要求1所述的一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述底物溶液由AMPPD溶解于底物缓冲溶液中配制而成；所述底物缓冲液包括以下组分：纯化水、三（羟甲基）氨基甲烷、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、硫酸镁和氯化锌和十二烷基磺酸钠，所述底物缓冲液中的三（羟甲基）氨基甲烷的浓度为10mM-100mM，所述底物缓冲液中的2-氨基-2-甲基-1-丙醇的浓度为0.01M-0.5M，所述底物缓冲液中的硫酸镁的浓度为0.02-0.2M，所述底物缓冲液中的氯化锌的浓度为0.02-0.2M，所述底物缓冲液中的十二烷基磺酸钠的浓度为0.05-0.5M。 9.根据权利要求1所述的一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述清洗液通过以下方法制得：称取纯化水1000g，加入三（羟甲基）氨基甲烷60.7g、氯化钠5.0g搅拌溶解，用HCl调剂其pH为8.0，加入0.5ml的Tween-20，0.25ml的Proclin300，搅拌均匀，即为清洗液。 10.根据权利要求1所述的一种Gd-IgA1化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述磁性微粒为免疫磁性微粒且免疫磁性微粒的表面含有羧基基团，所述免疫磁性微粒的粒径在1um-3um。
所属类别：	发明专利