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原文传递灵菌红素在作为僵蚕劣品的定性定量标志物中的应用

专利名称：	灵菌红素在作为僵蚕劣品的定性定量标志物中的应用
摘要：	本发明公开了灵菌红素在作为僵蚕劣品的定性定量标志物中的应用。本发明通过对这种僵蚕劣品中的灵菌红素进行提取、浓缩纯化，应用UPLC法定性定量的检测劣品僵蚕中灵菌红素的含量进而达到控制僵蚕质量与安全性的目的。本发明运用UPLC法定性定量的测定僵蚕劣品中红色物质灵菌红素，具有准确、稳定和快速检测僵蚕劣品中灵菌红素含量的特点，对于中药材僵蚕临床运用的安全性和有效性提供了一种新的技术支持。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏省中医院;贵州同德药业股份有限公司
发明人：	倪亮;姚毅;刘继平;旷翔;曾友兵;吴媛;甘兴林;易剑欢
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-15T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202311031583.X
公开号：	CN117074551A
代理机构：	南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：	唐惠芬
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/12;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/12;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86
申请人地址：	210046 江苏省南京市汉中路155号;
主权项：	1.灵菌红素在作为僵蚕劣品的定性定量标志物中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用，对僵蚕劣品中的灵菌红素进行检测，其特征在于，包括以下步骤： (1)灵菌红素标准溶液制备和标准曲线建立：灵菌红素标准储备液制备：准确称取灵菌红素粉末，溶于甲醇定容，封装于棕色瓶内，避光保存；灵菌红素标准溶液制备：取灵菌红素标准储备液，加甲醇依次稀释得到不同浓度的灵菌红素标准溶液；吸取不同浓度的灵菌红素标准溶液注入超高效液相色谱仪，以峰面积为纵坐标Y，灵菌红素对照品溶液浓度为横坐标X，进行线性回归分析，绘制灵菌红素标准曲线方程； (2)中药僵蚕劣品供试品溶液的制备：取表面为红色的僵蚕死蚕，经自然风干、烘干、粉碎、过筛，得到中药僵蚕劣品粉末；取僵蚕劣品粉末，加8～12倍量体积的乙酸乙酯中，加热回流提取1～3次，每次0.5～4小时，过滤，合并提取液，得到僵蚕劣品提取液，浓缩，浓缩液用甲醇稀释并过微孔滤膜，以滤过的续滤液作为中药僵蚕劣品的供试品溶液； (3)僵蚕劣品中灵菌红素的测定：取步骤(2)中药僵蚕劣品的供试品溶液注入超高效液相色谱仪分析；然后将灵菌红素的峰面积代入步骤(1)的标准曲线方程，计算出中药僵蚕劣品中灵菌红素的含量。 3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(1)和步骤(3)的色谱条件为：流动相以甲酸溶液为A相，以乙腈为B相，梯度洗脱；检测波长为545nm；流速为0.5mL/分钟。 4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(2)中药僵蚕劣品供试品溶液的制备：称0.5g于100mL圆底烧瓶内，加入20mL乙酸乙酯加热回流提取4h，回流提取液进行浓缩成浸膏，僵蚕劣品浸膏用甲醇溶解过微孔滤膜，取续滤液作为中药僵蚕劣品供试品溶液。 5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(1)灵菌红素标准储备液制备和标准曲线建立：灵菌红素标准储备液：准确称取10mg灵菌红素溶于甲醇并定容至10ml；灵菌红素标准溶液：取灵菌红素标准储备液5mL，加甲醇定容至20mL，保存于棕色玻璃瓶容器中，得到浓度为250μg/mL的灵菌红素标准溶液；准确吸取浓度为250μg/mL的灵菌红素标准溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL于20mL塑料试管中，分别加甲醇稀释至5mL，得到不同浓度的灵菌红素标准溶液；吸取不同浓度的灵菌红素标准溶液注入超高效液相色谱仪，以峰面积为纵坐标Y，灵菌红素对照品溶液浓度为横坐标X，进行线性回归分析，绘制灵菌红素标准曲线方程为y＝8.49×106x-1.02×104，R2＝0.9999，线性范围为0.005-0.16mg/mL。 6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，梯度洗脱条件如下表：梯度洗脱条件时间/min 流动相A 流动相B 0～12min 95％～0％ 5％～100％ 12～13min 0％～0％ 100％～100％ 13～20min 0％～95％ 100％～5％。 7.根据权利要求1～6任一项所述的应用，其特征在于，中药僵蚕劣品中灵菌红素检出定量限为0.005mg/mL以上。
所属类别：	发明专利