主权项: |
1、发光细菌法快速检测海水中BOD的方法,其特征在于,该方法具体步骤如下:
一、发光细菌的培养:
菌种采用明亮发光杆菌T3变种(Photobacterium phosphoreum),制备发光细菌新鲜菌悬
液:
(1)斜面菌种培养:在新鲜斜面上接出第一代斜面,25℃±0.5℃培养24h后立即转接第
二代斜面,25℃±0.5℃培养24h后再转接第三代斜面,25℃±0.5℃培养24h后备用;
(2)摇瓶菌液培养:取第三代斜面菌种近一环,接种于装有30ml细菌培养液的100ml
三角烧瓶中,25℃±0.5℃,160r/min下培养24h备用;
(3)将培养后的发光细菌新鲜菌悬液稀释至每毫升108个~109个细胞,初始发光度不低
于800mV,备用;
斜面和菌液的营养基为:
胰蛋白胨0.5g NaCl 3g Na2HPO4 0.5g KH2PO4 0.5g
酵母0.5g 甘油0.3g 蒸馏水100ml 固体培养基加琼脂1.69g
二、BOD标准溶液的制备:
各自称取0.15g葡萄糖和谷氨酸溶解于1L的人工海水中,人工海水的配方为:
NaCl 20g
MgSO4 3.6g
MgCl2 7.2g
无水CaCl2 0.7g
蒸馏水 1000ml。
配得溶液的BOD值相当于220mg/L,将溶液稀为1mg/L、2mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、
10mg/L等6个梯度;
三、发光细菌发光度增加量的测定:
测定时的室温要控制在20~25℃,同一批样品在测定过程中要求温度波动不超过±1℃。
取若干试管,给每支管中加0.6ml步骤一培养的发光细菌菌液,部分作为对照管的试管中放
0.05ml人工海水,作为样品管的试管中放0.05mlBOD标准溶液,20min后放入发光光度计中
检测。
发光细菌发光度的增加量=样品管-空白管。 |