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原文传递一种抑癌能力遗传风险评估的基因检测方法

专利名称：	一种抑癌能力遗传风险评估的基因检测方法
摘要：	本发明公开了一种抑癌基因遗传风险评估的基因检测方法，其特征在于，通过同时检测分析个体的TP53BP1基因、TP53基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供抑癌基因的遗传风险评估、相关疾病风险规避的个性化健康指导。本发明的优点是可在基因损伤发生前就采取干预措施，从而避免基因损伤，从而降低与基因损伤相关的疾病(如肿瘤)的发病率和死亡率；从分子机理上进行肿瘤发病机理的分析，可用于肿瘤分子流行病学调查和肿瘤防治措施的制定。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海中优医药高科技有限公司
发明人：	傅咏南;毛丹丹;王校
专利状态：	有效
申请日期：	2008-08-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN200810042027.1
公开号：	CN101560549
代理机构：	上海申汇专利代理有限公司
代理人：	翁若莹
分类号：	C12Q1/68(2006.01)I
申请人地址：	200433上海市杨浦区国泰路11号701室
主权项：	1.一种抑癌基因遗传风险评估的基因检测方法，其特征在于，其方法为：步骤1.检测的样品类型与采样方法：用采样拭在20-30个被测者口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40 次以上，以保证采集到足量的细胞样本；步骤2.基因组DNA的抽提方法：采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时-2.5小时，共抽提20-30个被测者样本，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；步骤3：荧光定量PCR反应将每一个被测者样本分别放入3个反应孔，同时检测抑癌基因TP53(P53BP1) SEQ ID NO1：T-885G、抑癌基因TP53(P53BP1)SEQ ID NO2：Gln1136Lys、抑癌基因TP53(TP53)SEQ ID NO3：Arg72Pro 3个位点，20-30个被测者样本就有60-90个反应孔，并增设不含DNA模版的NTC空白对照孔；每一个反应孔的基因分型根据下表的引物和探针设计，采用 id="icf0001" file="A2008100420270002C1.tif" wi="15" he="4" top= "136" left = "147" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>-MGB 技术，进行检测试剂合成；在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μl，即浓度为20ng/μl的DNA模板2μl、1μl 10X荧光定量PCR反应缓冲液ABI id="icf0002" file="A2008100420270002C2.tif" wi="12" he="3" top= "162" left = "158" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/> id="icf0003" file="A2008100420270002C3.tif" wi="2" he="2" top= "170" left = "22" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>MGB、0.1μl 25mM d NTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μl 25mM MgCl2 溶液、0.02μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶、去离子水5.43μl、3个位点分别采用不同的正向引物(20μM，0.225μl)、反向引物(20μM，0.225μl)、VIC荧光探针(10μM，0.25μl)和FAM荧光探针(10μM，0.25μl)工具进行检测，将61-91个反应孔在ABI9700型PCR扩增仪上进行反应，先进行预热50℃、 2分钟，95℃、10分钟，然后再进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟、反应结束后取出后再放入ABI7900型荧光定量PCR仪上读取样品荧光量，并自动将20-30个被测者样本检测3个点位的数据对号入座到3个图中，同时生成3 张图，是抑癌基因TP53(P53BP1)SEQ ID NO1：T-885G图、抑癌基因TP53(P53BP1) SEQ ID NO2：Gln1136Lys图、抑癌基因TP53(TP53)SEQ ID NO3：Arg72Pro图；步骤4：SNP基因型分析将ABI7900型荧光定量PCR仪上显示的最终样本荧光信号的3个表和一个 NTC空白对照进行比较，每个位点理论上存在三种不同的信号，纯VIC荧光信号、 VIC和FAM杂合荧光信号以及纯FAM荧光信号，分别代表该位点三种不同的基因型； (1)、抑癌基因TP53(P53BP1)SEQ ID NO1：T-885G 在检测结果图中，共有21-31个点，每个点代表一个被测者样本的检测结果，坐标轴(X：0.4-0.5Y：0.3-0.4)区域为空白对照、坐标轴(X：0.2-0.4Y： 1.1-1.3)区域为TT基因型、坐标轴(X：0.6-0.8Y：0.7-1.0)区域为TG基因型、坐标轴(X：0.7-0.9Y：0.3-0.4)区域为GG基因型，其中，TT、TG为风险基因型，携带风险基因型时，蛋白质翻译减少或编码突变型蛋白质时均可导致细胞的恶变，导致癌症易感性增加； (2)、抑癌基因TP53(P53BP1)SEQ ID NO2：Gln1136Lys 在检测结果图中，共有21-31个点，每个点代表一个被测者样本的检测结果，坐标轴(X：0.0-0.1Y：0.1-0.3)区域为空白对照、坐标轴(X：0.0-0.1Y： 1.1-1.3)区域为AA基因型、坐标轴(X：0.2-0.3Y：0.9-1.2)区域为AG基因型、坐标轴(X：0.35-0.45Y：0.4-0.6)区域为CC基因型，其中，AA为风险基因型，携带风险基因型时，蛋白质翻译减少或编码突变型蛋白质时均可导致细胞的恶变，导致癌症易感性增加； (3)、抑癌基因TP53(TP53)SEQ ID NO3：Arg72Pro 在检测结果图中，共有21-31个点，每个点代表一个被测者样本的检测结果，坐标轴(X：0.0-0.1Y：0.3-0.4)区域为空白对照、坐标轴(X：0.1-0.3Y： 1.6-1.9)区域为CC基因型、坐标轴(X：0.6-0.8Y：1.1-1.4)区域为CG基因型、坐标轴(X：0.9-1.1Y：0.4-0.6)区域为GG基因型，其中，CC为风险基因型，携带风险基因型时，蛋白质翻译减少或编码突变型蛋白质时均可导致细胞的恶变，导致癌症易感性增加；每一个被测者的3个点落在3个表上哪个区域，即可知道被测者抑癌基因的遗传风险。
所属类别：	发明专利