专利名称: | 镍离子人工抗原螯合剂的合成及镍单克隆抗体的制备 |
摘要: | 一种镍离子人工抗原螯合剂的合成及镍单克隆抗体的制备。 以4-硝基邻苯二胺为原料经过一系列反应化学合成了6-溴乙酰氨 基-2,3-(N,N,N′,N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉,简称BATDQ, 作为合成镍人工抗原的双功能螯合剂,利用BATDQ的四乙酸和溴 乙酰氨基结构螯合镍离子及载体蛋白质,获得人工抗原。然后通 过人工抗原免疫BALB/c小鼠,并运用细胞融合、细胞克隆等技术 获得对应于镍的单克隆抗体,用于检测环境、食品中镍的残留。 本发明具有快速、灵敏、成本低、特别适合大批量现场快速检测 的特点,并且本发明中的镍人工抗原制备方法简单,成本低,而 单克隆抗体的制备技术相对比较成熟,便于规模化生产,检测技 术简单,易于推广。 |
专利类型: | 发明专利 |
国家地区组织代码: | 浙江;33 |
申请人: | 浙江林学院 |
发明人: | 郭 明;车晓青;姚嘉赟;刘 力 |
专利状态: | 有效 |
申请日期: | 2009-07-21T00:00:00+0800 |
发布日期: | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
申请号: | CN200910101118.2 |
公开号: | CN101597266 |
代理机构: | 杭州求是专利事务所有限公司 |
代理人: | 周 烽 |
分类号: | C07D241/42(2006.01)I |
申请人地址: | 311300浙江省临安市锦城街道环城北路88号 |
主权项: | 1.一种镍离子人工抗原螯合剂的合成方法,其特征包括下列 步骤: 1)6-硝基-2,3-二甲基喹喔啉的合成: 将2g 4-硝基邻苯二胺和1.13g丁二酮放入250mL单口烧 瓶中,以50mL无水乙醇为溶剂,加热回流2h,冷却至室温后抽 滤,加30mL无水乙醇结晶提纯,所得产物即为6-硝基-2,3-二 甲基喹喔啉; 2)6-硝基-2,3-二溴甲基喹喔啉的合成: 取0.5g第一步产物6-硝基-2,3-二甲基喹喔啉、0.202g 偶氮二异丁腈与1.14g N-溴代琥珀酰亚胺置于干燥的250mL单 口圆底烧瓶中,再取40mL四氯化碳加入烧瓶中,装上回流冷凝 管,抽真空并用氩气保护,将烧瓶置于事先加热到80℃的油浴中, 强力搅拌,并用火焰枪辅助加热使之快速回流,待反应完毕后, 将混合物冷却至室温再过滤,取滤液放入水浴锅中蒸馏、冷却, 得6-硝基-2,3-二溴甲基喹喔啉; 3)6-硝基-2,3-(N,N,N′,N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉的 合成: 在装有机械搅拌、回流冷凝管和恒压漏斗的三口烧瓶中,加 入1.99mL亚氨基二乙酸二乙酯、10mL干燥的乙腈和2.63g无 水碳酸钾粉末;搅拌下向反应混合液中滴加溶有1.805g 6-硝基 -2,3-二溴甲基喹喔啉的10mL干燥乙腈,回流8-10h,冷却, 滤去碳酸钾,滤液减压下旋转蒸发回收溶剂,得淡黄色油状液体; 往上述油状液中加入含3.48g结晶氢氧化钡的饱和溶液,室温下 充分搅拌至油状液体均转化为白色沉淀,抽滤钡盐并用蒸馏水充 分浸泡、洗涤; 然后将此钡盐转移到15mL蒸馏水中,将混合物加热煮沸, 加入硫酸至清液中不再出现混浊,过滤除去硫酸钡,再用沸水煮 洗硫酸钡残渣3次,将滤液和洗涤液合并,冰箱中冷却8-10h, 得到6-硝基-2,3-(N,N,N′,N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉; 4)6-氨基-2,3-(N,N,N′,N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉的合 成: 将100mL乙醇和2.025g 6-硝基-2,3-(N,N,N′,N′-四乙 酸)二甲胺基喹喔啉加入到250mL装有温度计、机械搅拌器的三 口瓶中,加入1.2g钯碳催化剂和5.29g水合肼,不断搅拌,在 80-85℃条件下反应4h后,趁热过滤,滤液经减压蒸去乙醇,冷 却后所得固体用50mL苯重结晶,得到6-氨基-2,3-(N,N,N′,N′ -四乙酸)二甲胺基喹喔啉; 5)6-溴乙酰氨基-2,3-(N,N,N′,N′-四乙酸)二甲胺基喹 喔啉的合成: 取5.05g溴乙酰溴溶于30mL三氯化碳中,2.105g碳酸氢 钠溶于100mL水中,冰浴中将碳酸氢钠溶液缓慢滴加到溴乙酰溴 溶液中,取18.722g 6-氨基-2,3-(N,N,N′,N′-四乙酸)二甲胺 基喹喔啉装入三口烧瓶中,温度保持在50-60℃,快速搅拌的同时 把溴乙酰溴和碳酸氢钠混合液缓慢地滴入6-氨基-2,3-(N,N,N′, N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉中,并用氢氧化钠溶液控制反应体系 的pH为12.0,滴加完毕,升温到90℃,搅拌,将溶剂全部蒸出, 加入50mL浓盐酸,过滤分离出氯化钠,然后往盐酸提取液中加 入150mL无水乙醇,产生白色沉淀,4℃存放8-10h,用50%的 乙醇水溶液重结晶,得6-溴乙酰氨基-2,3-(N,N,N′,N′-四乙 酸)二甲胺基喹喔啉; |
所属类别: | 发明专利 |