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原文传递镍离子人工抗原螯合剂的合成及镍单克隆抗体的制备

专利名称：	镍离子人工抗原螯合剂的合成及镍单克隆抗体的制备
摘要：	一种镍离子人工抗原螯合剂的合成及镍单克隆抗体的制备。以4-硝基邻苯二胺为原料经过一系列反应化学合成了6-溴乙酰氨基-2，3-(N，N，N′，N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉，简称BATDQ，作为合成镍人工抗原的双功能螯合剂，利用BATDQ的四乙酸和溴乙酰氨基结构螯合镍离子及载体蛋白质，获得人工抗原。然后通过人工抗原免疫BALB/c小鼠，并运用细胞融合、细胞克隆等技术获得对应于镍的单克隆抗体，用于检测环境、食品中镍的残留。本发明具有快速、灵敏、成本低、特别适合大批量现场快速检测的特点，并且本发明中的镍人工抗原制备方法简单，成本低，而单克隆抗体的制备技术相对比较成熟，便于规模化生产，检测技术简单，易于推广。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江林学院
发明人：	郭明;车晓青;姚嘉赟;刘力
专利状态：	有效
申请日期：	2009-07-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN200910101118.2
公开号：	CN101597266
代理机构：	杭州求是专利事务所有限公司
代理人：	周烽
分类号：	C07D241/42(2006.01)I
申请人地址：	311300浙江省临安市锦城街道环城北路88号
主权项：	1.一种镍离子人工抗原螯合剂的合成方法，其特征包括下列步骤： 1)6-硝基-2，3-二甲基喹喔啉的合成：将2g 4-硝基邻苯二胺和1.13g丁二酮放入250mL单口烧瓶中，以50mL无水乙醇为溶剂，加热回流2h，冷却至室温后抽滤，加30mL无水乙醇结晶提纯，所得产物即为6-硝基-2，3-二甲基喹喔啉； 2)6-硝基-2，3-二溴甲基喹喔啉的合成：取0.5g第一步产物6-硝基-2，3-二甲基喹喔啉、0.202g 偶氮二异丁腈与1.14g N-溴代琥珀酰亚胺置于干燥的250mL单口圆底烧瓶中，再取40mL四氯化碳加入烧瓶中，装上回流冷凝管，抽真空并用氩气保护，将烧瓶置于事先加热到80℃的油浴中，强力搅拌，并用火焰枪辅助加热使之快速回流，待反应完毕后，将混合物冷却至室温再过滤，取滤液放入水浴锅中蒸馏、冷却，得6-硝基-2，3-二溴甲基喹喔啉； 3)6-硝基-2，3-(N，N，N′，N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉的合成：在装有机械搅拌、回流冷凝管和恒压漏斗的三口烧瓶中，加入1.99mL亚氨基二乙酸二乙酯、10mL干燥的乙腈和2.63g无水碳酸钾粉末；搅拌下向反应混合液中滴加溶有1.805g 6-硝基 -2，3-二溴甲基喹喔啉的10mL干燥乙腈，回流8-10h，冷却，滤去碳酸钾，滤液减压下旋转蒸发回收溶剂，得淡黄色油状液体；往上述油状液中加入含3.48g结晶氢氧化钡的饱和溶液，室温下充分搅拌至油状液体均转化为白色沉淀，抽滤钡盐并用蒸馏水充分浸泡、洗涤；然后将此钡盐转移到15mL蒸馏水中，将混合物加热煮沸，加入硫酸至清液中不再出现混浊，过滤除去硫酸钡，再用沸水煮洗硫酸钡残渣3次，将滤液和洗涤液合并，冰箱中冷却8-10h，得到6-硝基-2，3-(N，N，N′，N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉； 4)6-氨基-2，3-(N，N，N′，N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉的合成：将100mL乙醇和2.025g 6-硝基-2，3-(N，N，N′，N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉加入到250mL装有温度计、机械搅拌器的三口瓶中，加入1.2g钯碳催化剂和5.29g水合肼，不断搅拌，在 80-85℃条件下反应4h后，趁热过滤，滤液经减压蒸去乙醇，冷却后所得固体用50mL苯重结晶，得到6-氨基-2，3-(N，N，N′，N′ -四乙酸)二甲胺基喹喔啉； 5)6-溴乙酰氨基-2，3-(N，N，N′，N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉的合成：取5.05g溴乙酰溴溶于30mL三氯化碳中，2.105g碳酸氢钠溶于100mL水中，冰浴中将碳酸氢钠溶液缓慢滴加到溴乙酰溴溶液中，取18.722g 6-氨基-2，3-(N，N，N′，N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉装入三口烧瓶中，温度保持在50-60℃，快速搅拌的同时把溴乙酰溴和碳酸氢钠混合液缓慢地滴入6-氨基-2，3-(N，N，N′， N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉中，并用氢氧化钠溶液控制反应体系的pH为12.0，滴加完毕，升温到90℃，搅拌，将溶剂全部蒸出，加入50mL浓盐酸，过滤分离出氯化钠，然后往盐酸提取液中加入150mL无水乙醇，产生白色沉淀，4℃存放8-10h，用50％的乙醇水溶液重结晶，得6-溴乙酰氨基-2，3-(N，N，N′，N′-四乙酸)二甲胺基喹喔啉；
所属类别：	发明专利