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海产品中异尖线虫的酶联免疫检测方法
| 专利名称： | 海产品中异尖线虫的酶联免疫检测方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种海产品中异尖线虫的酶联免疫检测方法，该方法分离纯化异尖属幼 虫的虫体抗原，利用生物免疫技术制备特异性多克隆抗体；以96孔聚苯乙烯板为固相载 体，事先以相应的完全抗原进行包被、载体蛋白进行封闭；检测时同时以不含有待测物的 提取液为阴性对照，以异尖线虫抗原的标准液建立标准曲线；利用常规间接竞争酶联免疫 吸附(ELISA)检测样品的吸光值并计算相应的抑制率，进而根据标准曲线测定样本中待 测物(以虫体抗原计)的浓度。本发明灵敏度高、准确性好；操作简便快速，有效缩短了 分析时间，可应用于鱼类等海产品中异尖线虫的快速筛选检测。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 山东;37 |
| 申请人： | 中国海洋大学 |
| 发明人： | 曹立民;许 旭;林 洪;隋建新 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2009-07-10T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN200910016820.9 |
| 公开号： | CN101603964 |
| 分类号： | G01N33/569(2006.01)I |
| 申请人地址： | 266100山东省青岛市崂山区松岭路238号 |
| 主权项： | 1.一种利用免疫试剂盒检测海产品中异尖线虫的方法，其特征在于包括以下步骤： (1)从海产鱼类中采集分离异尖线虫并制备虫体抗原； (2)利用生物免疫技术制备并纯化异尖线虫的特异性抗体； (3)以虫体抗原包被96孔酶标板并进行封闭处理； (4)对待测样本中的异尖线虫进行分离提取； (5)将工作浓度的抗体溶液与样品提取液同时加入96孔板中，按照常规间接竞争酶 联免疫(ELISA)的步骤和方法进行反应，最终利用酶标仪测定OD450值； (6)同时以不含有待测物的提取液代替样品液，同样条件下反应后作为阴性对照；以 系列浓度的虫体抗原标准液代替样品液，同样条件下反应后建立标准曲线； (7)样本与阴性对照进行比较，引起吸光值降低10％以上即判断为阳性样本，即含有 待测异尖线虫，否则为阴性样本；并根据所建立的标准曲线进行回归分析测定待 测样本中异尖线虫(以虫体抗原计)的浓度。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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