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原文传递前哨淋巴结快速诊断试剂盒

专利名称：	前哨淋巴结快速诊断试剂盒
摘要：	本发明公开了前哨淋巴结快速诊断试剂盒，由大鼠抗人moc-31抗体、大鼠抗人CD44v6-FITC抗体、大鼠抗人her-2-percp抗体和大鼠抗人Mucin1-PE抗体四种抗体制备而成，其制备检测方法包括前哨淋巴结单细胞悬液的制备、免疫磁珠的预洗、moc-31抗体的标记、细胞分离、细胞洗脱和流式细胞分析，本发明的优点在于：操作较为方便，用时较少，整个过程能在60-70分钟内完成。并且其与传统的术中冰冻HE染色和CK-IHC相比，在前哨淋巴结转移诊断的敏感性和假阴性率方面有明显的优势。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江阴诺格生物科技有限公司
发明人：	鞠景芳;卢斌峰;严俊
专利状态：	有效
申请日期：	2010-10-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201010512724.6
公开号：	CN101975860A
代理机构：	江苏英特东华律师事务所 32229
代理人：	邵鋆
分类号：	G01N33/577(2006.01)I
申请人地址：	214431 江苏省无锡市江阴经济开发区砂山路85号（6楼A4）百桥生物园
主权项：	前哨淋巴结快速诊断试剂盒，其特征在于：由大鼠抗人moc31抗体、大鼠抗人CD44v6FITC抗体、大鼠抗人her2percp抗体和大鼠抗人Mucin1PE抗体四种抗体制备而成，其制备检测方法如下：（1）前哨淋巴结单细胞悬液的制备：将前哨淋巴结组织用生理盐水湿润，剥离淋巴结表面的脂肪及结缔组织，将前哨淋巴结分为四份，将其中两部分分别进行冰冻HE染色及CKIHC染色，剩余的两部分行免疫磁珠分离，并充分剪碎，研磨，冲洗，收集细胞，将所收集的单细胞悬液通过滤器除菌，离心，弃上清；（2）免疫磁珠的预洗：按照每个靶细胞约48个磁珠的比例，加入适量的磁珠，置于无菌的聚丙烯管中，将磁珠重悬于TRISEDTA缓冲液中，混匀，将聚丙烯管分别置于磁性分离架上分离，吸取上层清液，将聚丙烯管中的磁珠重悬于缓冲液中冲洗；（3）moc31抗体的标记：将所需量的moc31抗体加入前哨淋巴结的单细胞悬液中，共育，然后离心，弃上清，重悬下层沉淀于TRISEDTA缓冲液中；（4）细胞分离：将所得前哨淋巴结单细胞悬液加入预洗过的磁珠中，并混合，避光、共育，置于磁性分离架上进行细胞分离，弃上清，并重悬磁珠于TRISEDTA缓冲液中；（5）细胞洗脱：在每管冻干的DnaseI中加入CollectionReleasingBufferII，溶解，混匀，分装洗脱液，低温保存，将磁珠重悬于含0.1%FCS（FetalCalfSerum）的buffer3（Buffer3配方：PBS+0.1%BSA）中预处理，分离缓冲液加入到各管中，充分吹匀，使细胞洗脱最大化，磁性分离，将已洗脱的细胞上清液置于已预处理的聚丙烯管中，将剩下的磁珠重悬于buffer3中；（6）流式细胞分析：将免疫磁珠分离所富集的细胞产品重悬于缓冲液中，并置于流式管中，加入鼠抗人CD44V6FITC单抗、鼠抗人her2percp单抗、大鼠抗人Mucin1PE单抗，离心，弃上层清液，将所得的细胞重洗，洗去残余抗体，将细胞重悬于多聚甲醛或PBS中，上流式仪检测定量。
所属类别：	发明专利