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PCR扩增基因核转悬浮动物细胞的方法
| 专利名称： | PCR扩增基因核转悬浮动物细胞的方法 |
| 摘要： | 本发明涉及一种生物技术领域的PCR扩增基因核转悬浮动物细胞的方法，包括如下步骤：以重组目的基因的表达质粒为模板，设计PCR引物；其中，正向PCR引物位于质粒启动子（目的基因对应启动子）上游，反向PCR引物位于质粒转录终止子（目的基因对应终止子）下游；以重组目的基因的表达质粒为PCR模板，通过所设计的PCR引物进行PCR扩增；回收PCR产物；选取PCR产物，按照Lonza公司核转试剂盒标准操作程序进行细胞转染。与核转质粒相比，核转PaGene能够显著降低悬浮动物细胞的死亡率；PaGene在保证核转悬浮动物细胞较低死亡率的情况下，转染效率亦没有显著降低或降低很少。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 申请人： | 上海市公共卫生临床中心 |
| 发明人： | 吴康;范小勇;黄家颖;赵旭杰 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2014-01-09T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201410010269.8 |
| 公开号： | CN103740760A |
| 代理机构： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 |
| 代理人： | 牛山;陈少凌 |
| 分类号： | C12N15/87(2006.01)I |
| 申请人地址： | 201508 上海市金山区漕廊公路2901号 |
| 主权项： | 一种PCR扩增基因核转悬浮动物细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，以重组目的基因的表达质粒为模板，设计PCR引物；其中，正向PCR引物位于质粒启动子上游，反向PCR引物位于质粒转录终止子下游；步骤二，以重组目的基因的表达质粒为PCR模板，通过所设计的PCR引物进行PCR扩增；PCR扩增所用的DNA聚合酶为具有校正功能的高保真DNA聚合酶；步骤三，回收PCR产物，即PaGene，并定量及测定A260/A280、A260/A230比值；A260/A280和A260/A230比值需≥1.8，以保证PaGene具有较高的完整性和纯度；步骤四，选取PaGene，按照Lonza公司核转试剂盒标准操作程序进行悬浮动物细胞转染，所用PaGene用与对应质粒相同摩尔数的剂量进行核转，进而完成PaGene核转悬浮动物细胞。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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