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利用HTRF一步法筛选CD47/SIRP alpha阻断剂的方法
| 专利名称： | 利用HTRF一步法筛选CD47/SIRP alpha阻断剂的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种利用HTRF一步法筛选CD47/SIRP alpha阻断剂的方法，属于阻断剂筛选方法领域。该筛选方法包括如下步骤：配置已构建好的带有不同标签的CD47及SIRP alpha蛋白，作为待筛选样品；在微孔板中依次加入待筛选样品CD47及SIRP alpha蛋白；室温孵育，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值为原始数据。本发明实现了生化水平的CD47/SIRP alpha各种阻断剂的筛选，可以在短时间内有效的筛选出高表达的细胞株克隆，加快了医药研发行业的进程。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 上海;31 |
| 申请人： | 浠思（上海）生物技术有限公司 |
| 发明人： | 王维娜 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810630920.X |
| 公开号： | CN108872569A |
| 分类号： | G01N33/543(2006.01)I;G01N33/533(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/533 |
| 申请人地址： | 201210 上海市浦东新区张衡路1299号2幢401室 |
| 主权项： | 1.一种利用HTRF一步法筛选CD47/SIRP alpha阻断剂的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤一，配置已构建好的带有不同标签的CD47及SIRP alpha蛋白，作为待筛选样品；步骤二，在微孔板中依次加入待筛选样品CD47及SIRP alpha蛋白，上述两种对应的带标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor；步骤三，室温孵育，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值为原始数据；其中上述偶联Donor和Acceptor的两种标签抗体分别检测相互作用的蛋白CD47和SIRP alpha，从而形成四个物质聚合的复合物，拉近Donor和Acceptor的距离，能量能够从Donor上转移到Acceptor上，使Acceptor产生荧光；若样品能抑制二者结合，则随着阻断剂浓度的增加，665nm/620nm的比值降低；待稳定后测定荧光值的变化便可量化阻断剂的效价IC50；检测的为HTRF的两个荧光665nm和620nm，即时间分辨荧光，其中665nm/620nm的比值越低，阻断剂的效应越高。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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