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原文传递猪细小病毒的液相芯片检测方法

专利名称：	猪细小病毒的液相芯片检测方法
摘要：	本发明公开了一种猪细小病毒的液相芯片检测方法，旨在提供一种特异性强、灵敏度高，检测成本低，操作简单PPV抗体的液相芯片检测方法；其技术方案包括下述步骤：抗原包被；2)将血清样本2倍倍比稀释，将包被好的微球用PBS‑TBN稀释至50个/μL，重悬微球；)向96孔ELISA板中每孔加入50μL已稀释好的微球；加入血清样本；孵育120min，分离微球，加入100μL/孔的PBS‑TBN洗涤液，弃去洗液，将反应板从磁性分离器取下，加入100μL生物素标记的羊抗猪二抗，孵育，分离微球，弃去反应液，洗液，每孔加入藻红蛋白标记的链霉亲和素100uL，孵育30min；分离微球，弃加入100μLPBS‑TBN，将反应板置于振荡器振荡1min；利用luminex系统上机读取荧光中值并计算阳性MFI值与阴性MFI值的比值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东省实验动物监测所
发明人：	肖丽;郭鹏举;丛锋;陈梅丽;黄韧
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810740252.6
公开号：	CN108918870A
代理机构：	广州市科丰知识产权代理事务所(普通合伙) 44467
代理人：	王海曼
分类号：	G01N33/569(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/68
申请人地址：	510000 广东省广州市高新科技产业开发区科学城风信路11号
主权项：	1.一种猪细小病毒的液相芯片检测方法，其特征在于，依次包括下述步骤：1)抗原包被2)xMAP检测(1)检测血清样本准备，将血清样本2倍倍比稀释；(2)将包被好的PPV微球用PBS‑TBN稀释至50个/μL；(3)漩涡振荡和超声各10s，重悬微球；(4)向96孔ELISA板中每孔加入50μL已稀释好的微球；(5)加入50μL已稀释的血清，稀释度为1:800。(6)盖好板盖，将反应板置于振荡器，室温轻微震荡孵育120min；(7)将反应板置于磁性分离器3‑5min，分离微球，弃去反应液，加入100μL/孔的PBS‑TBN洗涤液，弃去洗液，重复一次；(8)将反应板从磁性分离器取下，加入100μL生物素标记的羊抗猪二抗；(9)盖好板盖，将反应板置于振荡器，室温轻微震荡孵育60min；(10)将反应板置于磁性分离器3‑5min，分离微球，弃去反应液，加入100μL/孔的PBS‑TBN洗涤液，弃去洗液重复一次；(11)每孔加入藻红蛋白标记的链霉亲和素100uL，室温轻微震荡孵育30min；(12)反应板置于磁性分离器3‑5min，分离微球，弃去反应液，加入100μL/孔的PBS‑TBN洗涤液，弃去洗液，重复一次；(13)将反应板从磁性分离器取下，加入100μLPBS‑TBN，将反应板置于振荡器振荡1min；(14)利用luminex系统上机读取荧光中值并计算阳性MFI值与阴性MFI值的比值，即P/N值，将P/N值大于等于3的结果定义为阳性，当血清不同稀释度与MFI值呈线性关系，且最大阳性参考品的P/N值大于5，说明包被有效。
所属类别：	发明专利