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原文传递一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法

专利名称：	一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法
摘要：	本发明公开了一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7(E.coli O157:H7)的免疫层析检测方法，以活性染料为染色剂制备彩色二氧化硅纳米微球colored SiNPs，在体系中通过羧基乙基硅烷三醇钠盐将羧基修饰到colored SiNPs表面，得到羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl‑modified colored SiNPs；在carboxyl‑modified colored SiNPs表面固定鼠抗E.coli O157:H7的单克隆标记抗体mAb1制备免疫核壳型二氧化硅纳米颗粒colored SiNPs‑mAb1；将鼠抗E.coli O157:H7单克隆捕获抗体mAb2包被至NC膜的检测线，羊抗鼠IgG包被至质控线；用预先混合致病菌样品和colored SiNPs‑mAb1的方法，将生成的复合物一起滴至试纸条的加样孔，在T线与mAb2形成三明治夹心结构，实现对E.coli O157:H7的快速检测。本发明方法具有良好的检测灵敏度和特异性，简单省时，过程环保经济，具有巨大的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江工商大学
发明人：	窦文超;赵广英;祝春节;吴遵义
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810444880.X
公开号：	CN108614111A
代理机构：	杭州求是专利事务所有限公司 33200
代理人：	刘静;邱启旺
分类号：	G01N33/558(2006.01)I;G01N33/543(2006.01)I;G01N33/569(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/569
申请人地址：	310018 浙江省杭州市下沙高教园区学正街18号
主权项：	1.一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法，其特征在于，该方法包括：(1)制备彩色二氧化硅纳米微球：在水溶液中加入二氧化硅纳米微球、有机染料和硅烷偶联剂，通过硅烷偶联剂将有机染料一步反应连接到二氧化硅纳米微球上，制得彩色二氧化硅纳米微球colored SiNPs；(2)在体系中通过羧基乙基硅烷三醇钠盐将羧基修饰到彩色二氧化硅纳米微球colored SiNPs的表面，得到羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl‑modified colored SiNPs；(3)在羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl‑modified colored SiNP表面进行抗体偶联：通过碳二亚胺化学法在羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl‑modified colored SiNP表面固定鼠抗E.coli O157:H7单克隆标记抗体mAb1，制备免疫核壳型二氧化硅纳米颗粒colored SiNPs‑mAb1；(4)免疫层析试纸条的组装：试纸条由样品垫、释放垫、NC膜、吸水纸组成，将鼠抗E.coli O157:H7单克隆捕获抗体mAb2喷涂于NC膜的检测线，将羊抗鼠IgG喷涂于质控线，将喷好的NC膜贴于PVC底板，依次将吸水纸、释放垫和样品垫组装至PVC底板，完成试纸条的组装；(5)将待测样品和步骤(3)制备的免疫核壳型二氧化硅纳米颗粒colored SiNPs‑mAb1混合后滴至试纸条的加样孔，在检测线与mAb2形成三明治夹心结构，实现对大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测。
所属类别：	发明专利

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