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一种基于蛋白质组学的主动脉缩窄标志物检测的方法
| 专利名称： | 一种基于蛋白质组学的主动脉缩窄标志物检测的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于蛋白质组学的主动脉缩窄标志物检测的方法，属于蛋白检测技术领域，包括如下步骤：样品蛋白提取、蛋白定量、蛋白酶解、iTRAQ标记、进行蛋白质分析、检测结果、后续验证。本发明明确主动脉缩窄患儿血清特异性差异蛋白，制备临床主动脉缩窄实验室检查中灵敏度好、特异性较高的蛋白标志物，从而达到降低主动脉缩窄的患儿病程早期的误诊率的目的，可以结合现阶段常规超声心动图检查进而降低主动脉缩窄患儿的病程早期误诊率，在临床实际应用中具有重要的意义。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 南京市儿童医院 |
| 发明人： | 莫绪明;徐诚;徐阳;束亚琴 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810911300.3 |
| 公开号： | CN109030834A |
| 代理机构： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 |
| 代理人： | 汤东凤 |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01)I;G01N30/89(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N30;G01N33/68;G01N30/89 |
| 申请人地址： | 210000 江苏省南京市建邺区江东南路8号 |
| 主权项： | 1.一种基于蛋白质组学的主动脉缩窄标志物检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：样品蛋白提取用采血管抽取iTRAQ实验血清标本静脉血，收集上层血清，低温保存；步骤2：蛋白定量将稀释的样本和标准品分别和蛋白定量染料避光反应，同时测定标准品和样本的吸光值，计算各样品蛋白浓度；步骤3：蛋白酶解通过还原剂、半胱氨酸阻断剂、缓冲液、胰蛋白酶反应，收集酶解后的样品；步骤4：iTRAQ标记取出iTRAQ试剂，加入异丙醇，将iTRAQ试剂添加到步骤3得到的样品中反应，确认标记后将样品保存待用；步骤5：高pH条件下的反相色谱分离混合步骤4中保存的样品，用试剂溶解，使用酶解好的BSA进行分离，得到分离梯度数据；步骤6：蛋白质分析将反相分离得到的组份用试剂复溶，吸取上清上样，得到分离梯度数据，选择数据库进行质谱分析得到差异表达蛋白；步骤7：检测分析经iTRAQ检出蛋白的数据，通过主动脉缩窄的疾病组与对照组对比，对比值小于特定值，认为是蛋白表达下调，对比值大于特定值，认为是蛋白表达上调；步骤8：验证后续对所筛选出来的CTTN蛋白进行大样本的验证。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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