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一种快速检测甲型流感病毒的方法
| 专利名称： | 一种快速检测甲型流感病毒的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种快速检测甲型流感病毒的方法，包括以下步骤：制备：取0.01%氯金酸水溶液100mL，加热至沸腾，加入1%柠檬酸三钠水溶液1.3mL，继续煮沸10min，冷却，制得胶体金；标记物制备：取上述制得胶体金100mL。本发明通过以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗甲型流感病毒内部抗原的单克隆抗体，硝酸纤维素膜上包被两种抗甲型流感病毒单克隆抗体的混合液，制成免疫层析试纸，待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合，后移动至硝酸纤维素上与固定的单克隆抗体发生反应，形成肉眼可见的红色带，不仅简便快速、无需特殊仪器设备而且特异性强，对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 安徽;34 |
| 申请人： | 合肥安为康医学检验有限公司 |
| 发明人： | 汤衡 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810449006.5 |
| 公开号： | CN108680743A |
| 分类号： | G01N33/569(2006.01)I;G01N33/531(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/531 |
| 申请人地址： | 230011 安徽省合肥市高新区红枫路富邻广场2号研发楼406室 |
| 主权项： | 1.一种快速检测甲型流感病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：制备：取0.01%氯金酸水溶液100mL，加热至沸腾，加入1%柠檬酸三钠水溶液 1.3mL，继续煮沸10min，冷却，制得胶体金；标记物制备：取上述制得胶体金100mL，用0.1mol/L K2CO3调节至pH8.2，边搅拌边缓慢加入单克隆抗体3F1 3mg，继续搅拌30min后加入BSA至终浓度 1%，加入PEG至终浓度0.5%，继续搅拌30min，3000 r/min离心10 min，弃沉淀，上清8500 r/min 离心30 min，弃上清，以pH7.0，0.01mol/L‑2%BSA 悬浮沉淀，制得胶体金标记物溶液，将玻璃纤维浸泡于胶体金标记溶液中，取出冷冻干燥；抗体包被：单克隆抗体3F1和3E8 分别稀释成3 mg/mL，后等量混合，羊抗鼠IgG稀释成2.5mg/mL，将以上两种液体分别吸入喷膜机的两个注射器中，以1μL/cm喷于硝酸纤维素膜中间位置，两条线间隔0.5 cm，37C干燥过夜；试纸条组装：试纸条由吸水纸、硝酸纤维素膜、样品垫和塑料板组成，将各部分依次粘贴到塑料板上，用切条机切成4 mm宽的条，加干燥剂密封于铝泊袋中；检测：将检测试纸条放于水平桌面上，取100μL待测样品滴于加样处，第10‑15min读取结果，15min后的结果无效；特异性测定：测定试纸与甲型流感病科毒及乙型流感病毒、副流感病毒、腺病毒和呼吸道合尿胞病毒等病毒标本的特异性反应；灵敏性测定: 选取3个代表性甲型流感病毒毒株A/京防/53/97、A/莫斯科/13/98和A/贵防/10/94，做系列稀释，以原液为基准，分别稀释至1：10、1：100、1：500、1：800、1：1000和1：1200，测定可检测的最高稀释度。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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