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一种花生微管骨架免疫抗体标记方法
| 专利名称： | 一种花生微管骨架免疫抗体标记方法 |
| 摘要： | 本发明属于细胞生物学技术领域，特别涉及一种花生微管骨架免疫抗体标记方法，包括切取花生组织样本浸泡在微管固定液中进行固定；冷冻切片后依次用甲醇、NaBH4溶液、甘氨酸溶液浸泡浸泡去除非特异性荧光；封闭液浸泡后依次用α微管蛋白一抗工作液、FITC标记的二抗工作液孵育；加抗荧光淬灭剂后封片保存。本发明率先建立了花生组织水平上的微管骨架免疫标记方法，简单便捷，适用范围广，能准确清洗的观测到花生微管骨架，结果可靠稳定。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 河南;41 |
| 申请人： | 河南省农业科学院经济作物研究所 |
| 发明人： | 张新友;韩锁义;李艺;董文召;苗利娟;杜培;臧秀旺;汤丰收;黄冰艳;郑峥 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201811005717.X |
| 公开号： | CN109085337A |
| 代理机构： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 |
| 代理人： | 李振瑞 |
| 分类号： | G01N33/533(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/533 |
| 申请人地址： | 450000 河南省郑州市花园路116号 |
| 主权项： | 1.一种花生微管骨架免疫抗体标记方法，其特征在于，包括如下步骤：材料固定：切取花生组织样本浸泡在微管固定液中，室温6～8h，得固定组织样本；其中，微管固定液为PEM混合液，其中含50mmol/L的哌嗪‑1,4‑二乙磺酸、5mmol/L的乙二醇二乙醚二胺四乙酸、5mmol/L的MgSO4以及质量浓度分别为0.3％的戊二醛、4％的多聚甲醛、0.01％的TritonX‑100及10％的二甲基亚枫；冷冻切片：在－35～－25℃下将固定组织样本制成切片；非特异性荧光的去除：包括如下步骤，S11，用－22～－18℃的甲醇浸泡切片12～18min，然后用漂洗液冲洗切片8～12min；S12，将S11中冲洗后的切片用1mg/mL的NaBH4溶液浸泡25～35min，然后用漂洗液冲洗切片8～12min；S13，将S12中冲洗后的切片用50mmol/L的甘氨酸溶液浸泡25～35min，然后用漂洗液冲洗切片8～12min；免疫抗体标记并制片：包括如下步骤，S21，将S13中冲洗后的切片用封闭液浸泡25～35min，然后取出切片用α微管蛋白一抗工作液在25～35℃下孵育1.5～2.5h，再用漂洗液漂洗3次，每次6～10min，得一抗切片；S22，将S21中一抗切片放入FITC标记的二抗工作液中在35～40℃下孵育1.5～2.5h，再用漂洗液漂洗3次，每次6～10min，得二抗切片；S23，在二抗切片上加1～3滴抗荧光淬灭剂，封片。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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