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原文传递一种拉曼光谱检测土壤氨基酸化合物中异构体的方法

专利名称：	一种拉曼光谱检测土壤氨基酸化合物中异构体的方法
摘要：	本发明公开了一种拉曼光谱检测土壤氨基酸化合物中异构体的方法，包括步骤如下：采集土壤样品，有机碳含量为12.51g·kg‑1，全氮1.52g·kg‑1。将采集得到的土壤样品过2mm筛，并将土壤湿度调节到田间持水量的60％，预培养1‑2周；称取10g土壤于小烧杯中，每周加入一次13C‑葡萄糖和(NH4)2SO4的混合溶液500μl，使加入的养分含量为每克土0.1mgN与1.0mgC，烧杯口覆盖封口膜，于24‑26℃下培养，分别在3‑6周后将土壤风干，过0.25mm筛后进行土壤氨基酸化合物中异构体测定，培养试验设1‑3次重复，每周利用称量法补充水分，使土壤湿度保持为田间持水量的60％，样品回收率的高低也并不影响异构体比例的质谱测定准确性。可见利用以上方法测定土壤氨基酸化合物中异构体的异构体富集比例是可靠的。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	洛阳师范学院
发明人：	陶亚萍;韩礼刚;张伟英;韩运侠
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810158802.3
公开号：	CN108226139A
代理机构：	北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427
代理人：	陈娟
分类号：	G01N21/65(2006.01)I;G01N1/28(2006.01)I;G01N1/34(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21;G01N1;G01N21/65;G01N1/28;G01N1/34
申请人地址：	471000 河南省洛阳市伊滨区吉庆路6号
主权项：	1.一种拉曼光谱检测土壤氨基酸化合物中异构体的方法，其特征在于，包括步骤如下：S1，采集土壤样品，有机碳含量为12.51g·kg‑1，全氮1.52g·kg‑1。将采集得到的土壤样品过2mm筛，并将土壤湿度调节到田间持水量的60％，预培养1‑2周；S2，称取10g土壤于小烧杯中，每周加入一次13C‑葡萄糖和(NH4)2SO4的混合溶液500μl，使加入的养分含量为每克土0.1mgN与1.0mgC，烧杯口覆盖封口膜，于24‑26℃下培养，分别在3‑6周后将土壤风干，过0.25mm筛后进行土壤氨基酸化合物中异构体测定，培养试验设1‑3次重复，每周利用称量法补充水分，使土壤湿度保持为田间持水量的60％；S3，将土壤样品利用拉曼光谱检测，每次测定均以原土为对照，然后水解：准确称取含有0.5g土壤样品置于水解瓶中，然后加入10ml的6mol·L‑1HCl，在105℃下水解12h；S4，纯化：向水解物中加入200μl浓度为80μg·ml‑1的正缬氨酸，振荡15s后过滤，滤液利用旋转蒸发仪，蒸发至干，将残留物用4ml浓度为0.05mol·L‑1HCl溶解后，利用阳离子交换树脂进行纯化，树脂用0.1mol·L‑1草酸，pH1.6～1.8，淋洗5次以除去土壤中Fe3+、Al3+等金属离子，每次用量5ml；S5，向树脂柱中先后加入5ml的0.01mol·L‑1HCl和5ml去离子水，淋洗液弃去，氨基酸利用25ml浓度为2.5mol·L‑1的NH3·H2O分5次洗脱，而后将各次洗脱液利用旋转蒸发仪蒸发至干，将干燥后的样品用4ml浓度为0.1mol·L‑1的HCl溶解，离心机15min，将上清液倒入5ml反应瓶中进行冷冻干燥；S6，衍生：向干燥后的样品中加入400μl浓度为4mol·L‑1的HCl‑异丙醇溶液后，旋紧反应瓶的瓶塞，在110℃下加热30min，冷却后，将上清液转移至1ml反应瓶中，用N2将溶液吹干，再向瓶中加入130μl二氯甲烷和130μl五氟丙酸酐，在110℃下加热10min，冷却至室温后，用N2将过量试剂吹干，将衍生物溶于150μl二氯甲烷，振荡并平衡30min后将上清液移至色谱内插管瓶中即可进行拉曼光谱检测。
所属类别：	发明专利