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原文传递一种酶法检测氧化三甲胺TMAO的方法及其应用

专利名称：	一种酶法检测氧化三甲胺TMAO的方法及其应用
摘要：	本发明公开了一种酶法检测氧化三甲胺TMAO的方法及其应用，该检测方法利用TMAO脱甲基酶tdm、甲醛脱氢酶fadh、甲酸脱氢酶fdh和黄递酶的多酶组合体系，实现TMAO的荧光测定，该方法可用于开发TMAO检测试剂盒；本发明的酶法检测氧化三甲胺TMAO的方法克服了TMAO代谢途径中没有NAD依赖性脱氢酶参与，无法直接基于脱氢酶‑黄递酶耦合测定的缺点，通过tdm‑fadh‑fdh‑黄递酶多酶耦合，构建了荧光测定TMAO的体系，在该体系中，1个TMAO分子分解成两个荧光信号，灵敏度高，检测迅速稳定，重复性好，操作简便，成本较低。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东大学第二医院
发明人：	张文;唐东起;江淼;王芳;刘江
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810166678.5
公开号：	CN108507984A
代理机构：	山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司 37108
代理人：	杨彪
分类号：	G01N21/64(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/64
申请人地址：	250033 山东省济南市北园大街247号
主权项：	1.一种酶法检测氧化三甲胺TMAO的方法，其特征在于：利用TMAO脱甲基酶tdm、甲醛脱氢酶fadh、甲酸脱氢酶fdh和黄递酶的多酶组合体系，实现TMAO的荧光测定；其中TMAO脱甲基酶tdm的编码基因序列为：ATGAATGTTAATGCGGCGGCCCCAAAGGGGTCGTTCGACCTGGACGCGCCCCGGCGCGTCCAGACCCTTTCGGCGGCGGGCGGCGGCGGGGTTCAGTTCGACCTTTCGGCCGGCGACGAAGCGATCATTACAAATCTCGAGGGGGGCCAGGCCGGCGAATTGCTGACCGCCTCCGGCGAGCCACTCCGGCTCACGCCGGGGTCGGCGCCGACCGACGAGGCCGGCGTCCGCGCCGTCGCGGGCGATCTCGCCGCCGCGTTCCTCGCCGCGCGGCAGGGAACCGAACGGTTTCTGGCGACGCCGCTTTTTCATGCCGCCGCGGAGCCGGGCGAAACCTTCCGCTTCAAGGCCGAGGCCGATATGCGCTGCCTTCTATTGGCGCCCGGCGAGCCGATGGCCCCCGACGCGCAGAATCCACCGACGGAACTGCGCCTCGATATTTTCTCAAGCCGGCCGACGGGCGGCGCCGCGCCGCCTTCGCTTGCCCCAGTAAAGCTCGATCTCAGGGTCGACGCCGCAACCGCGCGCGCTTATCGCGTCAGCGCCGGCGATTATATCCAGATCATCGACGTGGACGGCCGGCAATGCTCCGATCTCGTCGCCTTCGACGCCAGGGCCCTGGCTGAGGGCCGCGAGCTTGGCGTCGATCCGACAGTAACGCGCACGCTGATGGGCTCGGCGACGCCGGGCCCCGGCCTCCACGCGAAATATTTCGACCAGGACATGAATCCTCTCTTTGAGATCGTCCGCGACACCGTCGGGCGGCACGACACATTCATGCTCGCCTGCAACGCGAAATATTACGACGACATGGGCTATCCCGGCCACGCCAATTGCACCGACAATTTCAACGCCGCGCTTGCGCCCTTTGGCGTCGCGCCGCGTCGCGGCTGGCCGGCAATCAATTTTTTCTACAACACCTTCGTCGCCGAAGACAACACGATCGGCCTTGACGAGCCCTGGTCGCGACCGGGCGACTATGTGTTGCTGCGCGCTTTGACCGACCTCGTCTGCGCGTCCTCGTCCTGCGCCGACGACATTGATCCGGCCAATGGTTGGATGCCGACCGACATACATGTGCGCGTCTATGACGCCGCCGCCAGCTTCTCCAAAGGGATCGCTCATCGCATGACCGCTGACGCCGCCCCCCGATTGACGCGTGAATCCGGTTTCCATTCAAGGACTTCCGCGCTGACTCGGTCCTTCGCCGACTATCGCGGCTTCTGGACGCCGCAATGCTACGCCTCCGAGGGACCCATCGCCGAATATTGGGCCTGTCGCGAGCGCGCCGTCCTCATCGATCTGTCGGCGCTGCGCAAGTTCGAGATCACCGGACCGGACGCCGAAATCCTGTTGCAAAGCGCCGTCACGCGCAACATTCGCAAGCTTGCGGTGGGTCAGATCGTCTACACAGCGATTTGCCACGAACATGGCGGCATGCTGGATGACGGAACGGTGTTCCGTCTCGGC GACAATAACTTCCGGCTCGTCTGCGGCGAGGATTATTGCGGCGTCTTTCTGCGCGAGCTCGCGGCGCGTCAGGGTTTGAGGGCCTTTGTCAGATCCTCGACCGATCAGCTGCATAATGTCGCCCTGCAAGGCCCAAAATCGCGCGACATCCTGCGCGAAATATTGGTCACGCCGCCCCATCGCGCCTCAGCCGACGAGTTAAAATGGTTCCGCTTTACCGTCGGCAAGATCGCGGGCCTGCCTGTGCTTGTTTCCCGCACGGGCTACACCGGCGAGCTCGGATATGAGATCTGGCTGCACCCTGGCTCCGCCGTGGCGGTCTGGGACGCGCTTATGGCGGCGGGGAAGCCCTATGGGATCGCGCCCTTCGGTTTCGCCGCGCTTGACATGGTGCGCATCGAGGCCGGCCTGATCTTCGCCCATCACGAGTTTTGTGACGAGACCGATCCCTTCGAGGCCGGCATCGGCTTTGCCGTTCCCGCCGAGAAGGCGGACCCCTATGTCGGGTCGGAGGCGCTGGCGCGCCGGCGCGCCAGCCCGATTCGCCGGCTCGCCGGGCTCGACGTCGCCGGCAATGAAGCGGTCGCCCATGGCGATCCGGTCTTTGCCGGCCGCGCCCAGGTGGGAGTCGTCACCAGCGCGATGCGCTCGCCTGTCCTCGGCCGCACCATCGCCCTCGCCCGCCTCGACGCCGCTTGCGCCTCGATCGGGACCGACCTCGAGATCGGCAAGCTGGACGGACGTCAAAAGCGCATCGCCGCAACTGTGGCGCGATTCCCACACTATGATCCAGAAAAGGCGCGAGTCAGGGCATAG；TMAO脱甲基酶tdm蛋白的氨基酸序列为：MNVNAAAPKGSFDLDAPRRVQTLSAAGGGGVQFDLSAGDEAIITNLEGGQAGELLTASGEPLRLTPGSAPTDEAGVRAVAGDLAAAFLAARQGTERFLATPLFHAAAEPGETFRFKAEADMRCLLLAPGEPMAPDAQNPPTELRLDIFSSRPTGGAAPPSLAPVKLDLRVDAATARAYRVSAGDYIQIIDVDGRQCSDLVAFDARALAEGRELGVDPTVTRTLMGSATPGPGLHAKYFDQDMNPLFEIVRDTVGRHDTFMLACNAKYYDDMGYPGHANCTDNFNAALAPFGVAPRRGWPAINFFYNTFVAEDNTIGLDEPWSRPGDYVLLRALTDLVCASSSCADDIDPANGWMPTDIHVRVYDAAASFSKGIAHRMTADAAPRLTRESGFHSRTSALTRSFADYRGFWTPQCYASEGPIAEYWACRERAVLIDLSALRKFEITGPDAEILLQSAVTRNIRKLAVGQIVYTAICHEHGGMLDDGTVFRLGDNNFRLVCGEDYCGVFLRELAARQGLRAFVRSSTDQLHNVALQGPKSRDILREILVTPPHRASADELKWFRFTVGKIAGLPVLVSRTGYTGELGYEIWLHPGSAVAVWDALMAAGKPYGIAPFGFAALDMVRIEAGLIFAHHEFCDETDPFEAGIGFAVPAEKADPYVGSEALARRRASPIRRLAGLDVAGNEAVAHGDPVFAGRAQVGVVTSAMRSPVLGRTIALARLDAACASIGTDLEIGKLDGRQKRIAATVARFPHYDPEKARVRA；甲醛脱氢酶fadh的编码基因序列为：ATGTCTGGCAATCGTGGAGTGGTGTATCTCGGCGCTGGCAAGGTCGAAGTACAGAAGATCGACTACCCGAAAATGCAGGACCCGCGCGGCAAGAAAATCGAACACGGCGTCATCCTGAAGGTGGTCTCCACCAACATCTGCGGTTCTGACCAGCACATGGTCCGTGGCCGCACTACTGCCCAGGTCGGCCTGGTCCTGGGCCACGAAATCACCGGTGAAATCGTCGAGAAGGGCCGCGACGTCGAGCGCATGCAGATCGGCGACCTGGTATCGGTCCCGTTCAACGTCGCCTGCGGCCGCTGCCGCTCCTGCAAAGAGATGCACACCGGTGTCTGCCTCACCGTCAACCCGGCCCGCGCCGGCGGTGCCTACGGCTACGTCGACATGGGCGACTGGACCGGTGGCCAGGCCGAATACGTGCTGGTGCCATACGCCGACTTCAACCTGCTGAAGCTGCCTGAGCGCGACAAGGCCATGGAAAAGATCCGTGACCTGACCTGCCTGTCCGACATCCTGCCCACCGGCTATCACGGTGCCGTGACTGCTGGCGTTGGTCCAGGCAGCACTGTCTACGTTGCCGGTGCTGGCCCGGTCGGCCTGGCCGCCGCTGCCTCGGCGCGCCTGCTGGGCGCCGCCTGTGTAATCGTCGGTGACCTGAACCCGGCCCGCCTGGCCCACGCCAAGTCGCAAGGCTTCGAAGTGGTCGACCTGTCCAAGGACACCCCGCTGCACGAGCAGATCGTCGACATTCTCGGCGAGCCGGAAGTGGACTGCGCTGTCGACGCCGTCGGCTTCGAGGCCCGTGGCCATGGCCACGAAGGTGCCAAGCACGAGGCCCCGGCCACCGTGCTGAACTCGCTGATGCAAGTGACCCGCGTGGCCGGCAACATCGGTATCCCGGGCCTGTACGTGACCGAAGACCCGGGCGCGGTGGATGCCGCTGCCAAGATCGGCGCGCTGAGCATCCGCTTCGGCCTGGGCTGGGCGAAATCGCACAGCTTCCACACCGGCCAGACCCCGACCATGAAATACAACCGCCAGCTGATGCAGGCGATCATGTGGGACCGCATCAACATTGCTGAAGTGGTAGGTGTGCAGGTGATCAACCTGGATCAGGCGCCGGAAGGGTATGGCGAGTTTGATGCAGGTGTGCCGAAGAAATTCGTTATCGACCCGCACAAAATGTGGGGTGCGGCGTAA；甲酸脱氢酶fdh的编码基因序列为：ATGAAGGTTGTACTAGTTCTCTACGACGCAGGAAAACACGCCCAAGACGAGGAAAGACTCTACGGTTGCACCGAAAACGCCCTTGGTATCAGGGACTGGCTTGAGAAGCAGGGCCACGAGCTCGTTGTCACCAGTGACAAGGAGGGCGAGAATTCTGTGCTCGAGAAGAACATCCCGGACGCAGATGTCATCATCTCCACTCCTTTCCACCCGGCCTACATCACTAAGGAAAGAATTGACAAGGCCAAGAAGCTCAAGTTGCTGGTGGTTGCCGGAGTGGGATCCGACCACATCGACCTTGACTACATCAACCAGTCCGGCAGAGACATTTCTGTGCTGGAGGTGACCGGTTCGAACGTGGTTTCCGTTGCCGAGCACGTCGTGATGACGATGCTGGTGCTGGTCAGAAACTTTGTTCCTGCCCACGAGCAAATCATCTCTGGCGGCTGGAACGTGGCCGAGATTGCCAAGGACTCCTTCGATATCGAGGGTAAGGTCATTGCCACCATCGGAGCAGGCAGAATCGGCTACCGTGTGTTGGAGAGACTTGTCGCCTTCAACCCTAAGGAGCTGCTCTACTACGACTACCAGTCGCTGTCCAGAGAGGCCGAGGAGAAAGTCGGAGCCCGCAGAGTTCACGACATCAAGGAGCTGGTTGCCCAGGCCGACATTGTCACAATCAACTGTCCACTGCACGCCGGCTCGAAGGGCCTGGTCAACGCAGAGTTGCTCAAGCACTTCAAGAAGGGTGCCTGGCTCGTTAACACCGCCAGAGGTGCCATTTGTGTGGCCGAGGACGTTGCAGCAGCCGTCAAGAGCGGACAGCTCAGAGGATACGGTGGAGATGTGTGGTACCCACAGCCAGCTCCAAAGGACCACCCATGGAGATCTATGGCCAACAAGTACGGTGCTGGTAATGCCATGACTCCGCACTACTCGGGCTCTGTCATTGACGCCCAGGTCAGATACGCCCAGGGTACCAAGAACATCCTGGAGTCATTCTTCACTCAGAAGTTCGACTACAGACCTCAGGACATCATTCTGCTGAACGGTAAGTACAAGACCAAGTCGTACGGTGCCGACAAATGA。
所属类别：	发明专利