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原文传递一种检测组氨酸激酶活性的方法

专利名称：	一种检测组氨酸激酶活性的方法
摘要：	本发明涉及一种检测组氨酸激酶活性的方法，属于生物技术领域。主要技术方案如下：制备磷酸化组氨酸结构类似物完全抗原；制备磷酸化组氨酸结构类似物抗体；制备待检测蛋白样品；电泳；转膜；磷酸化组氨酸结构类似物抗体孵育、二抗孵育：将封闭后的PVDF膜放在装有1‑(2‑氨基丁基)‑1‑氢‑吡唑‑4‑基膦酸抗体溶液的盒子内，4℃条件下摇动孵育2小时；显影。本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种制备方便、成本低廉、特异性强、高效灵敏的磷酸化组氨酸结构类似物抗体，该抗体即可用于组氨酸激酶活性的检测，也可用于组氨酸磷酸化蛋白的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	大连民族大学
发明人：	权春善;张丽影;李容庆;王路路;范若辰;刘佳璐;范圣第;许永斌;郑维
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810643829.1
公开号：	CN108845145A
代理机构：	大连智高专利事务所(特殊普通合伙) 21235
代理人：	李楠
分类号：	G01N33/68(2006.01)I;G01N33/573(2006.01)I;G01N33/531(2006.01)I;C07K16/44(2006.01)I;C07K16/06(2006.01)I;G;C;G01;C07;G01N;C07K;G01N33;C07K16;G01N33/68;G01N33/573;G01N33/531;C07K16/44;C07K16/06
申请人地址：	116600 辽宁省大连市经济技术开发区辽河西路18号
主权项：	1.一种检测组氨酸激酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：(一)制备磷酸化组氨酸结构类似物完全抗原称取磷酸化组氨酸结构类似物、N‑羟基琥珀酰亚胺、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐依次溶于N，N‑二甲基甲酰胺中，20‑30℃下搅拌反应，得到活化溶液A；称取载体蛋白溶于碳酸氢钠溶液中，磁力搅拌，得到溶液B；在冰水浴下，将活化溶液A缓慢滴加到溶液B中，磁力搅拌，得到溶液C；将溶液C装入透析袋中，透析并离心得到完全抗原；所述磷酸化组氨酸结构类似物的化学名称为1‑(2‑氨基丁基)‑1‑氢‑吡唑‑4‑基膦酸，所述磷酸化组氨酸结构类似物的化学式为：(二)制备磷酸化组氨酸结构类似物抗体称取步骤(一)制备的完全抗原与等量的弗氏完全佐剂充分乳化用于基础免疫，或与等量的弗氏不完全佐剂充分乳化用于加强免疫，每次免疫间隔20天，共免疫3次；第三次免疫14天后将免疫动物处死取血，取得100mL血液；先将血液放在冰水浴下静置4小时，然后6000rpm离心10min，得到抗血清，将抗血清经亲和层析纯化得到磷酸化组氨酸结构类似物抗体；(三)制备待检测蛋白样品；(四)电泳；(五)转膜；(六)磷酸化组氨酸结构类似物抗体孵育、二抗孵育：将封闭后的PVDF膜放在装有1‑(2‑氨基丁基)‑1‑氢‑吡唑‑4‑基膦酸抗体溶液的盒子内，4℃条件下摇动孵育2小时；(七)显影。
所属类别：	发明专利