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原文传递针对呕吐毒素的TiO₂-B整合型免过氧化氢电致化学发光传感器的构建

专利名称：	针对呕吐毒素的TiO₂-B整合型免过氧化氢电致化学发光传感器的构建
摘要：	本发明公开一种针对呕吐毒素的TiO₂‑B整合型免过氧化氢电致化学发光传感器的构建，其是基于TiO₂‑B为纳米载体制备的高效的整合型电致化学发光探针实现对呕吐毒素的高灵敏检测，其特点在于TiO₂‑B纳米载体具有大的比表面积，可以负载大量的增敏剂氟代香豆素硅酞菁和电致化学发光试剂鲁米诺，成功制备了一种整合型电致化学发光探针。该探针在无过氧化氢溶液中即可获得高强度的电致化学发光信号。此外，以具有优异导电性和生物相容性的介孔纳米MnO₂的复合材料作为传感器基底，最终成功构建了一种灵敏度高、稳定性好、检测限低的免过氧化氢的电致化学发光免疫传感器，实现对呕吐毒素的高灵敏、高稳定性检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建师范大学
发明人：	戴宏;任卉竹;房丹丹;陈妍洁;衣欢;郑祥钦;彭亦如;颜建英
专利状态：	有效
申请号：	CN201810929822.6
公开号：	CN109115751A
代理机构：	福州智理专利代理有限公司 35208
代理人：	王义星
分类号：	G01N21/76(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	350108 福建省福州市闽侯县上街镇学园路福建师大旗山校区福建师大科研处
主权项：	1.一种针对呕吐毒素的TiO2‑B整合型免过氧化氢电致化学发光传感器的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）取1 mL 3 mg/ml的介孔纳米二氧化锰（mp MnO2）与1 mL 5 mg/ml的透明质酸（HA）在超声作用下混合均匀，将得到的均质溶液在室温下机械振荡4 h，经离心、洗涤，再分散制得HA@mp MnO2复合物溶液；滴加5 μL浓度为3 mg/ml HA@mp MnO2复合物悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得HA@mp MnO2修饰玻碳电极；（3）以0.1 mol/L 的高氯酸锂（LiClO4）为溶剂，在乙腈（acetonitrile）溶液中溶解0.01 mol/L 3,4‑乙撑二氧噻吩 (EDOT) 单体，在‑0.5 至1.0 V的电位窗口下，用循环伏安法在步骤（2）制备的电极上连续扫描6次，最终的到PEDOT@HA@mp MnO2修饰玻碳电极；（4）取5 μL浓度比为2:1的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）及N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液滴加到步骤（3）制得的修饰的电极上并在室温下反应40 min，红外灯下烘干，冷却至室温，再滴加5 μL浓度为50 ug/mL呕吐毒素抗体（Ab1）溶液在室温下孵育50 min，随后用去离子水洗去物理吸附的Ab1，制得Ab1@PEDOT@HA@mp MnO2修饰玻碳电极；（5）取体积比为2:1的5 mg/mL TiO2‑B 溶液与1.0 wt. % BSA在室温下混合震荡5 h，洗涤、离心、再分散得到TiO2‑B@BSA复合物溶液；然后向上述混合溶液中加入100 μL 1.0×10‑6 mol/L氟代香豆素硅酞菁（F‑couSiPcs）并在室温下温和摇晃1 h, 经离心、洗涤、再分散得到TiO2‑B@BSA@ F‑couSiPcs复合物溶液；再依次向上述溶液中加入 100 μL 1.0×10‑2 mol/L 鲁米诺，50 μL 5 wt.% 戊二醛溶液，室温下混合震荡4 h，经离心、洗涤、再分散得到TiO2‑B@BSA@ F‑couSiPcs@luminol复合物溶液, 最后再加入100 μL 50 ug/mL呕吐毒素IgG抗体（Ab2）溶液在室温下震荡50 min，经离心、洗涤、再分散制得整合型电致化学发光探针（TiO2‑B@BSA@ F‑couSiPcs@luminol@Ab2）复合物溶液，储存在4°C冰箱中备用；（6）将步骤（4）获得的修饰电极浸入不同浓度的呕吐毒素（DON）标准溶液中并室温下孵育40 mim，用去离子水冲洗电极表面，制得DON/Ab1@PEDOT@HA@mp MnO2修饰玻碳电极，然后取5 μL步骤（5）制备的整合型电致化学发光探针（TiO2‑B@BSA@ F‑couSiPcs@luminol@Ab2）复合物溶液滴加到DON/Ab1@PEDOT@HA@mp MnO2修饰的玻碳电极上，在室温下孵育50 min，用去离子水冲洗电极表面，制得TiO2‑B@BSA@ F‑couSiPcs@luminol@Ab2/DON/Ab1@PEDOT@HA@mp MnO2修饰玻碳电极。
所属类别：	发明专利