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1.一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法,其特征是,包括如下步骤:(1)制备已知浓度的葡萄糖标准溶液体系:于不同的刻度试管中,依次加入1μL‑40μL 500μmol/L葡萄糖标准溶液、10μL‑50μL 0.11mg/mL葡萄糖氧化酶溶液、100μL‑200μL 0.02mol/L pH 7.4PBS缓冲溶液和50μL‑150μL 0.5mmol/L TMB溶液,摇匀、于40℃水浴反应20min,冰水终止反应,用二次蒸馏水定容至1.5mL;(2)制备空白对照溶液体系:采用步骤(1)的方法不加葡萄糖标准溶液制备空白对照溶液体系;(3)分别取按步骤(1)、(2)制备的葡萄糖标准溶液体系及空白对照溶液体系倾入石英比色皿中,在荧光光谱仪上,设定仪器参数以280nm为激发波长扫描获得体系的荧光光谱,测定380nm处的荧光强度值为F,同时测定空白对照溶液体系的荧光强度值为F0,计算ΔF=F‑F0;(4)依据ΔF对葡萄糖的浓度关系做工作曲线;(5)依照步骤(1)的方法制备样品溶液,其中加入的葡萄糖标准溶液替换为样品溶液,并按步骤(3)的方法测定样品溶液的荧光峰强度值为F样品,计算ΔF样品=F样品‑F0;(6)依据步骤(4)的工作曲线,计算出样品溶液葡萄糖的含量。 |