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一种基于微流体技术的激光单细胞提取方法
| 专利名称： | 一种基于微流体技术的激光单细胞提取方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于微流体技术的激光单细胞提取方法，特点是：包括在载玻片表面覆盖一层PEN膜，并使用多聚赖氨酸溶液处理PEN膜表面；将载玻片装入捕获仪的微流体装置内；将经预处理的血液样本装载于捕获仪中，采用免疫磁微粒技术对靶细胞进行分离；取出载玻片干燥；用丙酮固定靶细胞，并进行免疫荧光染色；显微镜下观察读片，识别靶细胞；采用激光切割单个靶细胞，并去除杂质细胞；将切割后的带有单个靶细胞的PEN膜挑取至PCR管，或通过微流体在通道中收集，完成单细胞提取；优点是：操作简便，可实现单细胞捕获过程的自动化，减少试剂用量，单细胞捕获效率和提取效率高，能够有效保持被分离提取细胞的完整性，有利于细胞下游分析应用。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 浙江;33 |
| 申请人： | 宁波美晶医疗技术有限公司 |
| 发明人： | 张晓晶;沈挺 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请号： | CN201811165822.X |
| 公开号： | CN109270262A |
| 代理机构： | 宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙) 33226 |
| 代理人： | 陈怡菁 |
| 分类号： | G01N33/543(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 315100 浙江省宁波市高新区光华路299弄6幢12号1-1 |
| 主权项： | 1.一种基于微流体技术的激光单细胞提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）在载玻片表面覆盖一层厚度为2～5μm的PEN膜，并使用0.01～0.02%W/V的多聚赖氨酸溶液处理PEN膜表面，得到镀膜载玻片；（2）将镀膜载玻片装入微流体装置内，并安装至捕获仪内，并安装配套使用的捕获耗材包及配套试剂；（3）将血液样本进行预处理，将带有特定生物标志物的纳米磁珠结合到血液中的目标细胞上，然后将经过预处理的血液样本装载于捕获仪中，设置捕获仪的运行参数，采用免疫磁微粒技术对血液样本中的目标细胞进行分离，分离完成后得到附着于镀膜载玻片表面的靶细胞；（4）取出镀膜载玻片，37℃干燥；（5）用丙酮固定镀膜载玻片表面上的靶细胞，并采用免疫荧光染料对镀膜载玻片表面进行免疫荧光染色；（6）将染色后的镀膜载玻片放置在显微镜下观察读片，识别靶细胞和其余杂质细胞，其中细胞的免疫荧光显色反应满足判断标准的被判定为靶细胞；（7）在显微镜观察下，采用激光切割带有单个靶细胞的PEN膜，并去除切割范围内的杂质细胞；（8）在显微镜观察下，将切割后的带有单个靶细胞的PEN膜通过针手动拾取膜，并将其置于涂抹有粘合剂的PCR管中，使PEN膜的背面放置于粘合剂部分上；或者将切割后的带有单个靶细胞的PEN膜通过微流体在通道中收集单个靶细胞，完成单细胞提取。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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