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原文传递基于免疫磁珠和荧光量子点的纳米生物传感器快速检测肉鸡中恩诺沙星的方法

专利名称：	基于免疫磁珠和荧光量子点的纳米生物传感器快速检测肉鸡中恩诺沙星的方法
摘要：	本发明公开了一种基于免疫磁珠和荧光量子点的纳米生物传感器快速检测肉鸡中恩诺沙星的方法。在羧基化磁珠表面修饰恩诺沙星单克隆抗体，用牛血清白蛋白封闭，制备含牛血清白蛋白封闭的、恩诺沙星单克隆抗体修饰的免疫磁珠溶液；将恩诺沙星与牛血清白蛋白偶联，制备恩诺沙星‑牛血清白蛋白复合物；将得到的BSA‑ENR复合物与羧基化量子点偶联，制备量子点‑牛血清白蛋白‑恩诺沙星复合物；处理鸡肉组织样品，获得鸡肉样品提取液；定量检测提取液中恩诺沙星的浓度。本发明方法简单、快速、灵敏度高，而且不需要复杂的样品前处理过程，具备现场快速检测恩诺沙星的潜力，具有良好的发展前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江大学
发明人：	李延斌;沈亚芳;何雅雯;傅迎春
专利状态：	有效
申请号：	CN201811074054.7
公开号：	CN109283347A
代理机构：	杭州求是专利事务所有限公司 33200
代理人：	林超
分类号：	G01N33/94(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号
主权项：	1.一种基于免疫磁珠和荧光量子点的纳米生物传感器快速检测肉鸡中恩诺沙星的方法，其特征在于方法包括以下步骤：1)在羧基化磁珠表面修饰恩诺沙星单克隆抗体，用牛血清白蛋白封闭，制备含牛血清白蛋白封闭的、恩诺沙星单克隆抗体修饰的免疫磁珠(IMBs)溶液；2)将恩诺沙星(ENR)与牛血清白蛋白(BSA)偶联，制备恩诺沙星‑牛血清白蛋白(BSA‑ENR)复合物；3)将步骤2)中得到的BSA‑ENR复合物与羧基化量子点(QDs‑COOH)偶联，制备量子点‑牛血清白蛋白‑恩诺沙星(QDs‑BSA‑ENR)复合物；4)处理鸡肉组织样品，获得鸡肉样品提取液，具体如下：4.1)称取1‑5g切碎的鸡肉样品于均质袋中；4.2)向步骤4.1)所述含鸡肉样品的均质袋中加入质量浓度为1‑5％的5‑磺基水杨酸，于拍打式均质机中均质，得到含鸡肉组织的混合液；4.3)将上述步骤4.2)得到的含鸡肉组织的混合液在常温下3,000rpm以上离心5‑10min，得到上清液；4.4)将上述步骤4.3)得到的上清液用孔径0.22‑0.45μm的微孔滤膜过滤，得到鸡肉组织的提取液；4.5)将上述步骤4.4)得到的鸡肉组织的提取液用NaOH溶液调整至pH 5‑7.4，4℃下保存备用；5)定量检测步骤4)所述提取液中恩诺沙星的浓度，具体如下：5.1)建立恩诺沙星浓度与荧光值之间的标准曲线模型；5.1.1)在pH 5‑8的磷酸盐缓冲液中配制一系列已知浓度10‑2‑105ng mL‑1的恩诺沙星溶液；5.1.2)将步骤1)所述的含牛血清白蛋白封闭的、恩诺沙星单克隆抗体修饰的免疫磁珠溶液与上述步骤5.1.1)所述的含不同恩诺沙星浓度的溶液混合，置于旋转混匀仪上反应，反应后的混合液用pH 5‑8的磷酸盐缓冲液重复清洗3次，再分散于磷酸盐缓冲液中，获得表面修饰恩诺沙星的免疫磁珠(IMBs‑ENR)和未修饰恩诺沙星的磁珠(IMBs‑Non ENR)构成的混合溶液；5.1.3)取步骤5.1.2)获得的混合液，加入步骤3)的含牛血清白蛋白封闭的QDs‑BSA‑ENR复合物的分散液，置于旋转混匀仪上反应，反应后用pH 7.4的磷酸盐缓冲液重复清洗3次，再分散于磷酸盐缓冲液中，检测特定波长的荧光信号强度；5.1.4)将上述步骤5.1.3)所得的荧光信号强度与各自对应的恩诺沙星已知不同浓度通过拟合建立标准曲线模型；5.2)利用标准曲线模型检测待测鸡肉样品的恩诺沙星浓度。
所属类别：	发明专利