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原文传递刺梨SSR标记多态性检测的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法

专利名称：	刺梨SSR标记多态性检测的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法
摘要：	本发明公开了一种刺梨SSR标记多态性检测的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法。本发明针对刺梨SSR标记多态性检测优化出合适的凝胶及电泳参数，按照本发明的具体流程操作可以稳定的得到分辨率高、条带清晰的电泳图胶片。且本发明操作简单，重复性好，成本低廉。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵州大学
发明人：	安华明;张怀山;鲁敏;鄢秀芹;廖安红
专利状态：	有效
申请号：	CN201710619966.7
公开号：	CN109307703A
代理机构：	贵阳中新专利商标事务所 52100
代理人：	李亮;程新敏
分类号：	G01N27/447(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	550025 贵州省贵阳市花溪区贵州大学北校区科学技术处
主权项：	1.一种刺梨SSR标记多态性检测的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、聚丙烯酰胺凝胶制备：1)封胶：将平面玻璃板和凹面玻璃板放在桌面上，灌胶面朝上，滴无水乙醇于板面上，再用称量纸擦拭干净后阴干，在阴干后在凹面玻璃板的灌胶面滴上质量百分比为4％的亲和硅烷，并擦拭均匀，待阴干后将玻璃板置于制胶条内，使玻璃板与制胶条结合完全，然后将玻璃面呈60°倾斜放在支撑物上，平面玻璃板朝上；将浓度为30g/L琼脂糖溶液均匀的滴入制胶条与平面玻璃板结合部，整个过程要迅速，避免琼脂糖溶液凝固，15‑20分钟后，琼脂糖溶液凝固完全，完成封胶；2)配胶、灌胶、凝胶：将封好胶的玻璃板带制胶条放进垂直电泳槽内，拧紧旋钮。将以下母液逐一按量加入烧杯中混匀，按照用量由多到少的顺序先将30％Acr:Bis、10×TBE和ddH2O加入烧杯中充分混匀，然后加入20％AP和TEMED，用玻璃棒搅拌，充分混匀，然后将胶液沿着凹口变缓缓倒入两个玻璃板的夹层中，缓慢插入与胶厚度一致的梳子(倒胶与插梳子过程中要避免产生气泡)，将电泳槽置于25℃的环境中，待胶完全凝固，获得聚丙烯酰胺凝胶；步骤二、电泳：1)往电泳槽内加入适量1×TBE电泳缓冲液；2)用胶头滴管吹去梳子与玻璃板结合处的残胶，再拔出梳子，吸取电泳缓冲液冲洗点样孔，除去气泡；3)将SSR扩增产物样品加入点样孔中，最后点Marker DNA；4)恒压电泳90min，保持电压恒定150V；步骤三、银染显色：当染料接近胶底边缘或刚好抛出时，电泳结束；关闭电泳仪，回收电泳缓冲液，拧开电泳槽旋钮，取出玻璃板，小心的将封胶条取下，并去掉多余的琼脂糖胶；撬开平面玻璃板，使平面玻璃板与胶分离，而胶仍贴在凹面玻璃板上，然后开始银染显色，处理均在摇床上进行，具体步骤如下：1)固定：将凹面玻璃板放置在长方形盘内，加入质量百分比为10％的冰醋酸，在摇床上缓慢摇动固定15min，然后回收固定液；2)漂洗：用蒸馏水冲洗2次，每次2min；3)染色：将固定好的凝胶放入质量百分比为0.2％的硝酸银溶液中银染12min，保证摇床处于黑暗状态，然后回收硝酸银溶液；4)漂洗：用蒸馏水快速冲洗凝胶3‑4次，每次5s。5)显影：把凝胶放入显影液中，先暗显色3min，再打开光源，观察凝胶显色情况，待出现清晰条带后，显色完成；步骤四、照相：用凝胶成像分析仪照相。
所属类别：	发明专利