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原文传递一种糖皮质激素免疫层析广谱检测卡及其制备方法与应用

专利名称：	一种糖皮质激素免疫层析广谱检测卡及其制备方法与应用
摘要：	本发明提供一种糖皮质激素免疫层析广谱检测卡及其制备方法与应用。包括如下几个步骤：步骤（1）糖皮质激素免疫用半抗原的合成；步骤（2）糖皮质激素免疫抗原的合；步骤（3）糖皮质激素抗体的制备和纯化；步骤（4）糖皮质激素上转换发光标记抗体制备；步骤（5）包被抗原的制备；步骤（6）糖皮质激素包被抗原固相硝酸纤维素膜的制备；步骤（7）标记垫的制备；步骤（8）试纸条组装。本发明提高了检测范围，过去的糖皮质激素检测卡只能检测地塞米松，倍他米松等几种糖皮质激素，该发明由于采用多重上转换发色标记物，将3个广谱抗体集合于一张是纸条上。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳市计量质量检测研究院（国家高新技术计量站、国家数字电子产品质量监督检验中心）
发明人：	张世伟;姚添淇;杨国武;王士峰;劳翠瑜;冯荣虎;林霖;张恒;李碧芳;王坤;吴佳辉
专利状态：	有效
申请号：	CN201811406337.7
公开号：	CN109324183A
代理机构：	深圳市科吉华烽知识产权事务所(普通合伙) 44248
代理人：	胡玉
分类号：	G01N33/558(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	518000 广东省深圳市南山区西丽街道同发路4号
主权项：	1.一种糖皮质激素免疫层析广谱检测卡的制备方法，其特征在于，包括如下几个步骤：步骤（1）糖皮质激素免疫用半抗原的合成：将曲安奈德或氯倍他索和氟米松分别加入琥珀酸酐，反应后调节pH值，过滤后得到沉淀，并分为三份，分别命名为半抗原1、半抗原2、半抗原3；步骤（2）糖皮质激素免疫抗原的合成：将半抗原1、EDC和NHS加入DMF中，搅拌,滴加至KLH，继续搅拌后离心；上清液进行透析后得到糖皮质激素免疫抗原1；将半抗原2和半抗原3分别用同样的方法偶联KLH，得到免疫抗原2和免疫抗原3；步骤（3）糖皮质激素抗体的制备和纯化：用糖皮质激素免疫抗原1、免疫抗原2、免疫抗原3分别免疫新西兰大白兔，首次免疫注射时，分别免疫抗原，与等量弗氏完全佐剂充分乳化，皮下注射；间隔两周后，取用样的抗原，与不完全佐剂乳化，同样方法注射；免疫后，心脏采血，离心保留血清，得到糖皮质激素抗体1、糖皮质激素抗体2、糖皮质激素抗体3；步骤（4）糖皮质激素上转换发光标记抗体制备将半抗原1通过活泼酯交联发连接至氨基位点的琼脂糖凝胶上，用PBS洗脱，加入纯化抗体1；反应后，用PBS洗脱，加入活化羧基表面上的转换微球，反应后，用PBS洗脱，再加入氢氧化钠溶液，洗脱，收集氢氧化钠洗脱液并立刻用盐酸中和pH值；离心后弃去上清液，用标记抗体复溶液复溶，得到糖皮质激素抗体上转换发光标记物1；用同样的方法制备糖皮质激素抗体上转换发光标记物2和糖皮质激素抗体上转换发光标记物3；步骤（5 ）包被抗原的制备将泼尼松加入琥珀酸酐，室温反应后调节pH值，过滤沉淀得到沉淀；将该沉淀物以及EDC、NHS加入DMF，搅拌，滴加至人血清白蛋白，继续搅拌后离心；上清液进行透析后得到糖皮质激素包被抗原；步骤（6）糖皮质激素包被抗原固相硝酸纤维素膜的制备：取包被抗原用PB缓冲液经BIO‑DOT型XYZ3010点样仪dispenser线形包被于硝酸纤维素膜的观察结果的测试反应区，定义为检测带，质控带用dispenser线形包被羊抗小鼠，干燥、密封保存；步骤（7）标记垫的制备将糖皮质激素上转换发光标记抗体1，转换发光标记物2、转换发光标记物3混合均匀，并喷涂于吐温‑20预处理的玻璃纤维上；步骤（8）：试纸条组装：用PVB作为背衬，在PVC衬板的中部叠置硝酸纤维素膜，两端分别叠置吸水垫和标记垫，硝酸纤维素膜和吸水垫、标记垫相搭连。
所属类别：	发明专利