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一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法
| 专利名称： | 一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，步骤一、准备所需药剂：HEPES溶液、1‑豆蔻酰基‑2‑(4‑对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液、氢氧化钠溶液、脂蛋白磷脂酶A2校准液和蒸馏水备用，以及若干份血样，步骤二、HEPES缓冲液调配：称取238.3gHEPES溶液溶解在800ml蒸馏水中，加入1‑2M氢氧化钠水溶液调节至所需pH值，取用蒸馏水定容至1000mL，用带有瓶塞的烧瓶在4摄氏度存放备用，涉及酶法检测技术领域。该酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，通过取用上层悬浮液、中层悬浮液和下层悬浮液进行三种液位的测量，相比于常规实验只取用上层悬浮液，测定的范围更广，可避免因为上层悬浮液测定物含量过少，导致测量不准确的问题。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 湖北;42 |
| 申请人： | 武汉瀚海新酶生物科技有限公司 |
| 发明人： | 杨广宇;王存理;谢渊 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请号： | CN201811346334.9 |
| 公开号： | CN109374878A |
| 代理机构： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 |
| 代理人： | 冯子玲 |
| 分类号： | G01N33/50(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号武汉国家生物产业（九峰创新）基地B5栋 |
| 主权项： | 1.一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：步骤一、准备所需药剂：HEPES溶液、1‑豆蔻酰基‑2‑(4‑对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液、氢氧化钠溶液、脂蛋白磷脂酶A2校准液和蒸馏水备用，以及若干份血样。步骤二、HEPES缓冲液调配：称取238.3gHEPES溶液溶解在800ml蒸馏水中，加入1‑2M氢氧化钠水溶液调节至所需pH值，取用蒸馏水定容至1000mL，用带有瓶塞的烧瓶在4摄氏度存放备用。步骤三、血样配置，选取2mL血样，添加8mL蒸馏水，利用蒸馏水使细胞破裂，然后静置15分钟，使血样分层，分别取上层、中层和下层的悬浮液与三只试管中，贴标签备用，且三支试管样品均为1.1mL。步骤四、脂蛋白磷脂酶A2测定：三种血样试剂均取用1mL、1‑豆蔻酰基‑2‑(4‑对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液100mL和HEPES缓冲液25mL，将1‑豆蔻酰基‑2‑(4‑对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液与血样混合，置于漩涡振荡器上搅拌均匀，水浴5min，然后向样品中加入HEPES缓冲液，再次使用漩涡振荡器上混合均匀，然后加入脂蛋白磷脂酶A2校准液，调节pH值至7，将混合后的溶液放在恒温箱内恒温反应2min。步骤五、光谱分析：恒温反应结束后，用光谱仪对反应后的溶液进行光谱分析，读取其初始吸光度，然后连续监测4分钟，将溶液的吸光度变化列表，分析脂蛋白内磷脂酶A2的活性和浓度。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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