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原文传递一种基于[Ru(bpy)₃]²⁺/Zn-oxalate的免疫传感器的制备方法

专利名称：	一种基于[Ru(bpy)₃]²⁺/Zn-oxalate的免疫传感器的制备方法
摘要：	本发明涉及一种基于新型纳米多孔材料Ru(bpy)₃²⁺/Zn‑oxalate MOFs的双猝灭型电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用，属于电化学发光传感器领域，首次以纳米复合材料Ru(bpy)₃²⁺/Zn‑oxalate MOFs为电化学发光信号源，利用另一种纳米多孔材料Au@NiFe MOFs作为双重猝灭剂构建夹心型免疫传感器，根据不同浓度β‑淀粉样蛋白引起的电化学发光信号强度的不同，实现对β‑淀粉样蛋白的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	赵冠辉;曹伟;王耀光;李小建;东雪;房靖龙;魏琴
专利状态：	有效
申请号：	CN201811578268.8
公开号：	CN109444403A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240
代理人：	高强
分类号：	G01N33/531(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种基于Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs的双猝灭夹心型电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，步骤如下：（1）Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs的制备将10 mg ~ 20 mg三联吡啶氯化钌六水合物和80 mg ~ 120 mg硝酸锌同时加入到45 mL N, N‑二甲基甲酰胺和超纯水1 ~ 3:1的混合液中，继续加入200 μL ~ 400 μL、0.75 mol L‑1草酸，2 mL ~ 4 mL、3 mol L‑1盐酸，室温超声5 min，将混合物转移至圆底烧瓶中，60 ℃回流12 h ~ 36 h，离心分离悬浮物，分别用N, N‑二甲基甲酰胺和超纯水各洗涤三次得到橙红色沉淀，35 ℃真空干燥，得到Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs复合物；（2）Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs标记β‑淀粉样蛋白第一抗体孵化物溶液的制备将10 mmol ~ 30 mmol EDC和5 mmol ~ 15 mmol NHS加入到1 mL ~ 3 mL、1 mg mL‑1的Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs溶液4 ℃震荡反应2 h以活化Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs表面的羧基基团，洗去未反应交联剂后加入400 μL ~ 600 μL、1 μg mL‑1的β‑淀粉样蛋白第一抗体溶液继续4 ℃震荡反应10 h ~ 14 h使得第一抗体通过酰胺反应结合到Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs的表面，离心分离Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs标记β‑淀粉样蛋白第一抗体孵化物，用pH 7.5的PBS溶液洗去未反应的第一抗体后分散于pH = 7.5的PBS缓冲溶液中，制得0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs标记β‑淀粉样蛋白第一抗体溶液，储存于4 ℃中备用；（3）Au@NiFe MOFs的制备将140 mg ~ 160 mg六水合氯化镍和260 mg ~ 280 mg二水合柠檬酸三钠分散于20 mL超纯水中磁力搅拌5 min，同样将130 mg ~ 150 mg的铁氰化钾分散于20 mL超纯水中磁力搅拌5 min，然后将两种溶液混合继续在室温下搅拌8 h ~ 12 h，离心分离悬浮物，使用超纯水和乙醇分别洗涤2次，35 ℃真空干燥，得到土黄色纳米多孔NiFe MOFs；将30 mg ~ 50 mg纳米多孔NiFe MOFs分散在50 mL超纯水中，加入1 mL ~ 3 mL 1% ~ 3%的氯金酸溶液，室温下搅拌5 min，加入4 mg ~ 6 mg聚乙烯吡咯烷酮抑制金纳米粒子的团聚，然后加入70 mg ~ 90 mg还原剂柠檬酸三钠，0.5 mg ~ 1 mg硼氢化钠室温下搅拌8 h ~ 12 h，溶液慢慢变成紫黑色，离心分离悬浮物，超纯水洗涤至上清液无色，35 ℃真空干燥12 h，得到紫黑色固体Au@NiFe MOFs；（4）Au@NiFe MOFs标记β‑淀粉样蛋白第二抗体孵化物溶液的制备将6 mg ~ 10 mg的Au@NiFe MOFs分散于1 mL pH = 7.5的PBS中，加入4 μL ~ 6 μL、6 mg/mL的第二抗体，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h ~ 24 h，4 ℃离心分离洗去未结合第二抗体，然后加入1 mL 0.1%的牛血清白蛋白溶液4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化2 h ~ 4 h封闭Au@NiFe MOFs表面的非特异性活性位点，4 ℃离心分离洗去未结合的牛血清白蛋白，最后分散于pH = 7.5的PBS缓冲溶液中，制得0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Au@NiFe MOFs标记β‑淀粉样蛋白第二抗体溶液，储存于4 ℃中备用；（5）分别用1.0 mm、0.3 mm、0.05 mm的氧化铝抛光粉对直径4 mm的玻碳电极做抛光处理，用超纯水冲洗干净；（6）将6 µL、0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs标记β‑淀粉样蛋白第一抗体溶液滴涂至电极表面，4 ℃晾干；（7）将2 μL ~ 4 μL体积分数为0.5%的牛血清白蛋白溶液于电极表面，以封闭非特异性活性位点，用pH = 7.5的PBS缓冲溶液冲洗，4 ℃晾干；（8）将6 μL、一定浓度的β‑淀粉样蛋白溶液滴加到电极表面，用pH = 7.5的PBS缓冲溶液冲洗，4 ℃晾干（9）将6 μL、0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Au@NiFe MOFs标记β‑淀粉样蛋白第二抗体溶液滴加到电极表面，4 ℃晾干，用pH = 7.5的PBS缓冲溶液冲洗，制得一种基于Ru(bpy)32+/Zn‑oxalated MOFs的双猝灭夹心型电致化学发光免疫传感器。
所属类别：	发明专利