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原文传递一种点免疫印迹检测的检测装置及检测方法

专利名称：	一种点免疫印迹检测的检测装置及检测方法
摘要：	本发明提供一种点免疫印迹检测的检测装置，包括负压吸引装置、孔板、连接孔板和负压吸引装置的软管及紧密贴合在孔板上端面的硝酸纤维膜，所述孔板包括上层托板、密封连接在上层托板下方的下层托盘及设置于上层托板、下层托盘之间的负压空腔，所述下层托盘一侧设置有一供软管套接的连接管，所述上层托板上具有70个通孔，所述硝酸纤维膜与孔板上端面的大小相同。本发明还提供一种点免疫印迹检测的检测方法，包括准备、加样、封闭、孵育一抗、孵育二抗、显影、分析的过程，本发明通过负压吸引装置进行负压吸引，有利于加样时样品的集中，避免样品扩散后交叉污染影响实验结果，实验结果更准确。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南通大学附属医院
发明人：	肖明兵;许敏雪;季洁;谢旭东;陆玉华;薛万江;谭忠华;陆翠华;陈晓君;刘肇修
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910367764.7
公开号：	CN110068685A
代理机构：	北京科家知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	徐思波
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	226019 江苏省南通市西寺路20号
主权项：	1.一种点免疫印迹检测的检测装置，其特征在于，包括负压吸引装置、孔板、连接孔板和负压吸引装置的软管及紧密贴合在孔板上端面的硝酸纤维膜，所述孔板包括上层托板、密封连接在上层托板下方的下层托盘及设置于上层托板、下层托盘之间的负压空腔，所述下层托盘一侧设置有一供软管套接的连接管，所述上层托板上具有70个通孔，所述硝酸纤维膜与孔板上端面的大小相同。 2.根据权利要求1所述的一种点免疫印迹检测的检测装置，其特征在于，所述上层托板的尺寸为8 cm×6 cm，所述通孔直径为2 mm。 3.根据权利要求1所述的一种点免疫印迹检测的检测装置，其特征在于，所述负压吸引装置选用手提式吸痰器，所述手提式吸痰器的负压值设定为0.06 MPa。 4.根据权利要求1所述的一种点免疫印迹检测的检测装置，其特征在于，70个所述通孔呈10×7设置，每两个通孔之间距离相等。 5.根据权利要求1所述的一种用于免疫印迹检测的新型检测装置，其特征在于，所述孔板的上方可拆卸连接有一压板。 6.根据权利要求5所述的一种用于免疫印迹检测的新型检测装置，其特征在于，所述压板包括矩形边框及转动连接在矩形边框四周的卡扣，所述下层托盘的四周设置有供卡扣卡接的卡块。 7.一种使用权利要求1所述的点免疫印迹检测的检测装置进行点免疫印迹检测的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、准备：将手提式吸痰器通过软管和孔板相连接；将硝酸纤维膜剪至孔板上端面的上层托板大小，置于具有70个通孔的孔板上，打开手提式吸痰器，将手提式吸痰器的负压值设置为0.06 MPa，在硝酸纤维膜表面形成70个加样凹槽； S2、加样：将70个加样凹槽分为对照品孔和样本孔，每个重复3次，对照品孔和样本孔分别加入对照品和各待测样本1μL；加样结束，将硝酸纤维膜自然晾干30 min； S3、封闭：将硝酸纤维膜轻置于5%的脱脂奶粉溶液中，置于摇床上室温下封闭1.5 h；然后，弃去封闭液，用TBS-T漂洗1-2次；其中，5%脱脂奶粉溶液使用TBS-T溶液稀释至溶度为5%； S4、孵育一抗：用5% 牛血清白蛋白溶液按1:500比例稀释一抗，将硝酸纤维膜均匀的完全浸入其中，置于摇床上，37 ℃恒温孵育4 h；结束后将硝酸纤维膜放入TBS-T中摇床上洗涤3次，每次5 min；其中，5%牛血清白蛋白溶液采用TBS-T溶液稀释至溶度为5%； S5、孵育二抗：用1%脱脂奶粉溶液按1:5000比例稀释二抗，将硝酸纤维膜均匀的完全浸入其中，置于摇床上室温孵育1.5 h；结束后将硝酸纤维膜放入TBS-T中洗涤3次，每次15min；1%脱脂奶粉溶液使用TBS-T溶液稀释至溶度为1%； S6、显影：将洗涤完毕的硝酸纤维膜平铺于显影仪的适当位置，将显影剂均匀滴加于硝酸纤维膜上，采用凝胶成像系统曝光显影并保存； S7、分析：显影所得图像用Image J软件进行灰度值扫描分析；各样本目的蛋白的相对浓度用待测样本灰度值/对照样本灰度值表示。 8.根据权利要求7所述的一种点免疫印迹检测的检测方法，其特征在于，所述TBS-T溶液包括Tris、 NaCl、Tween-20 及ddH2O，其中，Tris的质量为 2.42 g，NaCl的质量为8.0 g，Tween-20的体积为1 mL，所述TBS-T溶液使用ddH2O将体积补充至1000 ml。 9.根据权利要求7所述的一种点免疫印迹检测的检测装置检测血清FGB的检测方法，其特征在于，所述样本孔可根据待测样本的组数设置为多组样本孔。
所属类别：	发明专利