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原文传递血清中心肌肌钙蛋白I复合物的定量测量方法

专利名称：	血清中心肌肌钙蛋白I复合物的定量测量方法
摘要：	本发明公开了一种血清中心肌肌钙蛋白I复合物的定量测量方法，先将EDTA螯合基质环境和cTnC本身所包含的Ca2+，再外加Ca2+使cTnC和Ca2+重新结合，最后通过EDTA螯合和cTnC结合的Ca2+，对Ca2+检测，从而定量测量血清中所有与cTnC结合的cTnI复合物。本发明的方法明确了被测物质，实现了对待测物质的范围划定，定义了混合物中被测组分中具体形式。通过ICP‑MS法简化了蛋白质前处理步骤，消除了过程中引入的其他变量和由此导致的不确定度。不选用特征肽段进入质谱的检测方法，消除了由于异质性而产生的质荷比改变所产生的结果差异。不选用制备过程复杂表征困难的同位素标记的重组cTnI作为内标，简化了实验方案。标准物质定值结果可最终溯源到SI单位。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国计量科学研究院
发明人：	宋德伟;职承瑶;李红梅;李志林;王馨雪;肖鹏;徐蓓
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910408895.5
公开号：	CN110068687A
代理机构：	北京双收知识产权代理有限公司
代理人：	李厚铭
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100029 北京市朝阳区北三环东路18号
主权项：	1.一种血清中心肌肌钙蛋白I复合物的定量测量方法，其特征在于：先将EDTA螯合基质环境和cTnC本身所包含的Ca2+，再外加Ca2+使cTnC和Ca2+重新结合，最后通过EDTA螯合和cTnC结合的Ca2+，对Ca2+检测，从而定量测量血清中所有与cTnC结合的cTnI复合物。 2.根据权利要求1所述的血清中心肌肌钙蛋白I复合物的定量测量方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)选用SRM(E)标准物质配制CaCl2标准浓度曲线； (2)用EDTA缓冲液配制cTnC的浓度梯度溶液； (3)使用磁珠免疫亲和法提取血清中心肌肌钙蛋白I复合物； (4)将提取出的复合物中加入500μL EDTA缓冲液； (5)将配制的cTnC溶液和提取出的心肌肌钙蛋白I复合物冰上孵育过夜； (6)将样品4℃透析24h，分别在5h、13h、20h时更换透析缓冲液； (7)将样品超速离心，离心条件为温度4℃、转速12000r、时间30min； (8)加入CaCl2缓冲液500μL，常温振荡反应4h，超速离心； (9)准确称量加入的500μLEDTA缓冲液摇床常温孵育过夜，超滤离心后进行ICP-MS检测分析； (10)得到钙标准溶液浓度与CPS的拟合公式A；将配制的cTnC溶液的CPS值代入拟合公式A，并得出样品内的Ca2+浓度，通过称量离心前与离心后离心管的质量差，将Ca2+浓度换算为质量单位，校正由于稀释和离心过程中由于体积变化而造成的实验误差，在实验过程中使用超纯水缓冲液中的Ca2+浓度忽略不计；计算出的Ca2+质量与cTnC溶液浓度进行线性拟合，将通过质量法计算的cTnC的实际浓度与计算得到的溶液中钙离子质量拟合线性公式B；将提取后的血清样品按照相同方法测得的CPS值代入两个线性拟合公式，并且校准体积后，得到血清中cTnI的定量结果。 3.根据权利要求2所述的血清中心肌肌钙蛋白I复合物的定量测量方法，其特征在于：所述EDTA缓冲液为20mM Tris、200mM KCI、1mM DTT、5mM EGTA、10mM EDTA，pH 6.5。 4.根据权利要求3所述的血清中心肌肌钙蛋白I复合物的定量测量方法，其特征在于：所述透析缓冲液为20mM Tris、200mM KCl、1mM DTT，pH7.5。 5.根据权利要求4所述的血清中心肌肌钙蛋白I复合物的定量测量方法，其特征在于：CaCl2缓冲液为20mM Tris、200mM KCl、1mM DTT、5mM CaCl2，pH7.5。 6.根据权利要求5所述的血清中心肌肌钙蛋白I复合物的定量测量方法，其特征在于：ICP-MS方法采用全定量模式，检测Ca43、Ca44两种同位素。
所属类别：	发明专利