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原文传递一种生物组织透明化成像方法

专利名称：	一种生物组织透明化成像方法
摘要：	本发明提供了一种生物组织透明化成像技术的改进及其应用，所述方法为CUBIC(Clear,Unobstructed Brain Imaging Cocktails and Computational Analysis)技术的改进，主要改进了CUBIC光透明技术的透明化效率以及GFP荧光的保持；该方法命名为f‑CUBIC(fast fluorescent‑CUBIC)。处理方法是向光透明试剂CUBIC‑L中加入胰脂酶lipase，以增加CUBIC‑L的脱脂能力，提高透明化的效率，另外，用NaOH调节折射率匹配试剂CUBIC‑R的pH值，提高透明化组织对GFP荧光信号的保持。本专利技术的试剂易于购买，价格便宜，操作简便，特别适合于对透明化困难的高脂含量组织的处理，如肝脏、脾脏等，且透明化时间短，荧光保持效果好，适用于多色光透明化荧光成像，提升了样本的荧光成像质量，扩大了样本的适用范围。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	华中科技大学
发明人：	张智红;徐梦丽;骆清铭
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910275731.X
公开号：	CN110068559A
代理机构：	北京众达德权知识产权代理有限公司
代理人：	刘杰
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	430074 湖北省武汉市洪山区珞喻路1037号
主权项：	1.一种生物组织透明化成像方法，步骤包括： S1、称取100-500U/mg的胰脂酶粉末溶解到CUBIC-L试剂中，使胰脂酶含量为4-100U/mL，得到CUBIC-L试剂A； S2、将离体组织在PFA溶液内浸泡，固定完成后清洗； S3、将步骤S1所得试剂稀释一倍得到CUBIC-L试剂B； S4、先采用CUBIC-L试剂B对步骤S2所得离体组织进行摇床孵育，再采用CUBIC-L试剂A对离体组织进行摇床孵育，定期换液直到离体组织透明； S5、清洗步骤S4所得透明组织，用稀释后的CUBIC-R试剂对透明组织进行摇床孵育，孵育好的组织用CUBIC-R试剂进行折射率匹配。 2.根据权利要求1所述的生物组织透明化成像方法，其特征在于：步骤S2中，先对动物样本进行灌流，然后获取所述离体组织样本；依次采用1×PBS、PFA溶液和含胰脂酶的PBS饱和试剂进行所述灌流；所述含胰脂酶的PBS饱和试剂的配制步骤包括：向1×PBS中加入100-500U/mg的胰脂酶粉末，溶解混匀，过滤去除不溶解的部分；其中，每100mL的1×PBS中加入0.15-0.25g胰脂酶粉末。 3.根据权利要求2所述的生物组织透明化成像方法，其特征在于：采用所述1×PBS灌流8-12min；采用PFA溶液灌流8-12min；采用含胰脂酶的PBS饱和试剂灌流50-70min。 4.根据权利要求1所述的生物组织透明化成像方法，其特征在于：步骤S2中，所述浸泡时长为23-25h，所述清洗为采用1×PBS对固定后的组织在室温下进行摇床清洗2-4次，每次清洗时长不少于2小时。 5.根据权利要求1所述的生物组织透明化成像方法，其特征在于：步骤S4中，采用CUBIC-L试剂B在36-38℃下对组织进行摇床孵育5-7h；采用CUBIC-L试剂A在36-38℃下对组织进行摇床孵育，孵育期间每23-25h换液一次直至组织变透明。 6.根据权利要求1所述的生物组织透明化成像方法，其特征在于：步骤S5中，所述稀释的倍数为一倍，且采用碱性试剂调节CUBIC-R试剂的pH至9～9.5。 7.根据权利要求1或6所述的生物组织透明化成像方法，其特征在于：步骤S3和步骤S5中，采用ddH2O进行所述稀释。 8.根据权利要求6所述的生物组织透明化成像方法，其特征在于：步骤S5中，所述碱性试剂为浓度1mol/L的NaOH。 9.根据权利要求1所述的生物组织透明化成像方法，其特征在于：步骤S5中，采用稀释后的CUBIC-R试剂室温下对透明组织进行摇床孵育5-7h。 10.根据权利要求1所述的生物组织透明化成像方法，其特征在于：步骤S5中，所述折射率匹配时间为23-25h。
所属类别：	发明专利