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原文传递基于金钯纳米花/石墨烯复合材料的组蛋白乙酰转移酶计时-电流传感器及其应用

专利名称：	基于金钯纳米花/石墨烯复合材料的组蛋白乙酰转移酶计时-电流传感器及其应用
摘要：	本发明公开了基于金钯纳米花/石墨烯复合材料的组蛋白乙酰转移酶计时‑电流传感器及其应用，首先将底物多肽利用Au‑S作用固定于金电极表面，通过乙酰化反应将乙酰辅酶A上的乙酰基转移至底物多肽的特定赖氨酸残基上，利用生成的乙酰化多肽将具有较强催化能力的乙酰基抗体‑金钯纳米花/石墨烯复合材料特异性吸附，在含有双氧水的电解质溶液中产生明显的电化学信号。在乙酰化反应中，改变p300浓度及其小分子抑制剂浓度，通过乙酰基和乙酰基抗体的特异性结合作用，探究对所制备的一系列传感器电化学信号的影响。优点是特异性好、灵敏度高、检测速度快、结果准确可靠、成本低。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	宁波大学
发明人：	胡宇芳;张青青;胡丹丹;郑宇迪;冉平建;刘鑫达;郭智勇;王邃;晁多斌
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201910287716.7
公开号：	CN110082403A
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	315211 浙江省宁波市江北区风华路818号宁波大学
主权项：	1.基于金钯纳米花/石墨烯复合材料的组蛋白乙酰转移酶计时-电流传感器及其应用，其特征在于，机理如下：利用乙酰基抗体-金钯纳米花/石墨烯复合材料，通过计时-电流法构建了一种新型的无酶电化学传感器，用于检测组蛋白乙酰转移酶活性。金钯纳米花/石墨烯复合材料有两个作用：通过大的比表面积以提高乙酰基抗体的固载量；利用纳米材料本身的催化性质，构建模拟酶实现信号的放大。 2.基于金钯纳米花/石墨烯复合材料的组蛋白乙酰转移酶计时-电流传感器及其应用，具体步骤如下： (1)乙酰基抗体-金钯纳米花/石墨烯复合材料(AbAc-AuPd@GO)的制备将0.1～1g石墨烯(GO)分散在10～30mL去离子水超声0.1～1h，再加入1～5mL0.1～3g/L的氯金酸(HAuCl4)溶液和1～5mL 0.1～3g/L的氯钯酸(H2PdCl4)溶液，磁力均匀搅拌0.1～1h，置于氙弧灯下照射0.1～1h，再转入干燥箱中，30～100℃反应10～36h。最后，将样本置于氢气管式炉中100～500℃反应0.5～5h。将制备的AuPd@GO分散在去离子水中得到0.1～5mg/mL的AuPd@GO分散液，备用。取1～300μL 0.1～5g/L乙酰基抗体(AbAc)置于氦氖激光治疗仪中照射5～60s，再添加到0.1～3mL上述AuPd@GO分散液中，30～42℃反应1～8h。 (2)组蛋白乙酰转移酶计时-电流传感器的制备 a.Au 金电极(Au)使用前分别用直径为0.1～0.5μm和0.01～0.1μm的Al2O3粉末进行打磨，利用超纯水通过超声清洗1～5次，之后置于氮气流中干燥，再将其浸泡于0.01～0.5M H2SO4溶液中，在(-0.1～0.5)V～(+0.5～1.5)V范围内进行循环伏安扫描5～30min，最后再经超纯水清洗后氮气吹干备用。 b.peptide/Au 将5～20μL 0.01～1mM底物多肽(peptide)滴涂于处理好的Au表面反应1～8h，通过Au-S键固定的底物多肽自组装单分子层，随后蒸馏水缓缓冲洗电极，再滴涂5～20μL组蛋白乙酰转移酶反应液【HAT p300(200～1000nM，1～5μL)与乙酰辅酶A(1～5mM，1～5μL)在磷酸缓冲溶液(PBS)中充分混合】，将电极置于25～37℃恒温箱中孵育30～120min。 c.AbAc-AuPd@GO/peptide/Au 取(1)中制备的AbAc-AuPd@GO溶液2～12μL滴涂于peptide/Au电极上，30～42℃下静置10～60min，随后蒸馏水缓缓冲洗电极，之后用于计时-电流检测。 3.根据权利要求1～2所述的电化学传感器的制备，其特征在于联合新型金钯纳米花/石墨烯复合材料和计时-电流法来实现p300的电化学检测。 4.根据权利要求1～3所述的计时-电流传感器的制备，可以实现不同浓度p300的检测，检测限低至0.37pM。 5.根据权利要求1～4所述的电化学传感器的制备，对p300小分子抑制剂C646进行检测，半抑制浓度为29.5μM。
所属类别：	发明专利