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原文传递脂蛋白a测定试剂盒及其制备方法

专利名称：	脂蛋白a测定试剂盒及其制备方法
摘要：	脂蛋白a测定试剂盒及其制备方法，涉及体外诊断试剂领域。本发明中的试剂1包括浓度为20～100mmol/L的甘氨酸、浓度为5～100g/L的PEG 6000、浓度为0.1～1mL/L的procline 300；试剂2包括浓度为20～100mmol/L活化缓冲液，浓度为20～100mmol/L的稀释缓冲液，浓度为20～100mmol/L的保存缓冲液、直径为50～180nm胶乳微球、浓度为0.1～1mg/mL脂蛋白a单克隆抗体、浓度为0.1％～2.5％封闭剂。本发明采用胶乳免疫比浊法进行测定，结果稳定可靠，准确度、线性范围和分析灵敏度高，特异性好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	吉林瑞特生物科技有限公司
发明人：	侯丹
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201910418244.4
公开号：	CN110082532A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	于晓庆
分类号：	G01N33/577(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130000 吉林省长春市净月开发区新城大街与天富路交汇处诺睿德商务广场内A8-106房屋
主权项：	1.脂蛋白a测定试剂盒，其特征在于，包括：试剂1和试剂2；所述试剂1包括：浓度为50～100mmol/L的甘氨酸、浓度为5～100g/L的PEG 6000、浓度为0.1～1mL/L的procline 300；所述试剂2包括：浓度为20～100mmol/L的活化缓冲液，浓度为20～100mmol/L的稀释缓冲液，浓度为20～100mmol/L的保存缓冲液、直径为50～180nm的胶乳微球、浓度为0.1～1mg/mL的脂蛋白a单克隆抗体、浓度为0.1～2.5％的封闭剂。 2.根据权利要求1所述的脂蛋白a测定试剂盒，其特征在于，所述试剂1包括：浓度为100mmol/L的甘氨酸、浓度为50g/L的PEG 6000、浓度为0.1mL/L的procline 300。 3.根据权利要求1所述的脂蛋白a测定试剂盒，其特征在于，所述试剂2包括：浓度为50mmol/L的活化缓冲液，浓度为100mmol/L的稀释缓冲液，浓度为50mmol/L的保存缓冲液、直径为100nm的胶乳微球、浓度为1mg/mL的脂蛋白a单克隆抗体、浓度为1％的封闭剂。所述活化缓冲液为MES缓冲液；所述稀释缓冲液为PBS缓冲液；所述保存缓冲液为甘氨酸缓冲液；所述封闭剂为BSA。 4.根据权利要求1所述的脂蛋白a测定试剂盒，其特征在于，所述试剂2的制备方法如下： (1)用活化缓冲液洗涤胶乳微球两次，10000r/min离心30min，得到胶乳微球沉淀； (2)将步骤(1)制备的胶乳微球沉淀用活化缓冲液悬起，混匀，得到胶乳悬液； (3)将步骤(2)制备的胶乳悬液进行偶联反应，依次加入浓度为20mg/mL的EDC溶液和浓度为40mg/mL的NHS溶液，每次加入后室温震荡混匀15min，用9000r/min离心30min，去上清，得到胶乳颗粒沉淀； (4)将步骤(3)制备的胶乳颗粒沉淀用缓冲稀释液悬起，混匀； (5)脂蛋白a单克隆抗体用缓冲稀释液稀释，包被抗体，将抗体溶液加入步骤(4)中，边加入边震荡混匀，胶乳颗粒浓度为0.5％(w/v)，脂蛋白a单克隆抗体浓度为1mg/mL，室温孵育2h； (6)向步骤(5)的反应液中加入1％BSA封闭，室温震荡孵育过夜； (7)将步骤(6)制备的溶液用9000r/min离心30min，去上清，加入保存缓冲液处理沉淀，4℃保存。 5.制备权利权利要求1至4中任意一项所述的脂蛋白a测定试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、配制试剂1 向容器中加入总配制量20～50％的纯化水，再按照配比浓度加入甘氨酸，搅拌均匀使其完全溶解，再依次加入PEG 6000、procline 300，搅拌均匀使其完全溶解，向容器中补加纯化水至总配制量，过滤，灌装于试剂瓶中，获得试剂1；步骤二、配制试剂2 将胶乳微球经活化缓冲液活化、包被抗体、封闭后获得试剂2。 6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤一的具体过程如下：用量筒量取纯化水500mL倒入1L烧杯中，加入甘氨酸7.507g，搅拌均匀使其完全溶解，再加入PEG 6000 50g、procline 300 100μL，搅拌均匀使其完全溶解；补加纯化水至1L，过滤，灌装于试剂瓶中，即为试剂1。 7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤二的具体过程如下： (1)用活化缓冲液洗涤胶乳微球两次，10000r/min离心30min，得到胶乳微球沉淀； (2)将步骤(1)制备的胶乳微球沉淀用活化缓冲液悬起，混匀，得到胶乳悬液； (3)将步骤(2)制备的胶乳悬液进行偶联反应，依次加入浓度为20mg/mL的EDC溶液和浓度为40mg/mL的NHS溶液，每次加入后室温震荡混匀15min，用9000r/min离心30min，去上清，得到胶乳颗粒沉淀； (4)将步骤(3)制备的胶乳颗粒沉淀用缓冲稀释液悬起，混匀； (5)脂蛋白a单克隆抗体用缓冲稀释液稀释，包被抗体，将抗体溶液加入步骤(4)中，边加入边震荡混匀，胶乳颗粒浓度为0.5％(w/v)，脂蛋白a单克隆抗体浓度为1mg/mL，室温孵育2h； (6)向步骤(5)的反应液中加入1％BSA封闭，室温震荡孵育过夜； (7)将步骤(6)制备的溶液用9000r/min离心30min，去上清，加入保存缓冲液处理沉淀，4℃保存。 8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述活化缓冲液包括MES缓冲液和NaCl溶液，所述MES缓冲液的浓度为20～100mmol/L，所述NaCl溶液的浓度20～100mmol/L，所述活化缓冲液的PH为5.0～6.0。 9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述稀释缓冲液包括PBS缓冲液(Na2HPO4和NaH2PO4)和NaCl溶液，所述PBS缓冲液的浓度为20～100mmol/L，所述NaCl溶液的浓度为120～180mmol/L，所述稀释缓冲液的PH为7.0～8.0。 10.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述保存缓冲液包括甘氨酸溶液和procline 300，所述甘氨酸溶液的浓度为20～100mmol/L，所述procline 300的浓度为0.05～0.15mL/L。
所属类别：	发明专利