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原文传递核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极的制备和应用

专利名称：	核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极的制备和应用
摘要：	本发明涉及一种核酸适配体‑镍铁氰纳米粒子‑RGO电极的制备及其对PCB77的电化学分析方法。该方法将直径约为5nm的镍铁氰纳米粒子原位共沉积于还原氧化石墨烯(RGO)表面，并修饰在金电极后，通过共价键合反应将PCB77适配体固定于镍铁氰纳米粒子‑RGO复合材料，制备得到了核酸适配体‑镍铁氰纳米粒子‑RGO电极，并将该电极用于对环境中PCB77的快速，实时检测。与现有的PCB 77检测方法相比，本发明采用了高灵敏的电化学方法与特异性识别能力的适配体结合实现了对惰性分子PCB77实现高灵敏、高选择性检测。检测限可达0.22ng/L。且本发明具有仪器设备简单、分析成本低、快速、简便等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山西;14
申请人：	山西大学
发明人：	范丽芳;王贵珍;梁桂芳;梁文婷;刘雪峰;郭玉晶;董川
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201910460683.1
公开号：	CN110082414A
代理机构：	太原市科瑞达专利代理有限公司
代理人：	刘宝贤
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	030006 山西省太原市小店区坞城路92号
主权项：	1.一种核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)取浓度为1.0～1.5mg/mL氧化石墨烯溶液2.5～4.0mL于反应瓶中，加入50.0～60.0ul浓度为10.0～12.0wt％的PDDA充分混匀，然后通过28％氨水调节pH到9～10.5；再加入45.0～55.0uL80％的水合肼，剧烈搅拌，将反应瓶放入水浴锅中加热3.5h，得到稳定的黑色悬浮液体RGO； (2)利用HCl将RGO溶液pH调节至2～4，在快速搅拌下，将浓度是均为15.0～25.0mM的K3[Fe(CN)6]和Ni(NO3)2加入RGO溶液中，继续搅拌4h，最后离心、洗涤，得到镍铁氰纳米粒子-RGO复合材料； (3)将镍铁氰纳米粒子-RGO复合材料固定于金电极表面，并将其置于2.0μM PCB77的适配体溶液中，再加入EDC和NHS反应8～12h，用0.1M pH为7.41的Tris-HCl缓冲溶液冲洗掉未反应的适配体，用牛血清蛋白堵塞剩余的活性位点，制备得到核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极。 2.根据权利要求1所述的一种核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中氧化石墨烯溶液的浓度是1.2mg/mL，PDDA的浓度为10.5wt％。 3.根据权利要求1所述的一种核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中水浴锅中加热温度为58～70℃。 4.根据权利要求1所述的一种核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极的制备方法，其特征是所述步骤(2)中K3[Fe(CN)6]和Ni(NO3)2的浓度是均为20.0mM。 5.根据权利要求1所述的一种核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极的制备方法，其特征是所述步骤(3)中EDC的浓度为25.0mg/mL，NHS的浓度为15.0mg/mL。 6.根据权利要求1-5任一所述方法制备的核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极。 7.根据权利要求6所述的核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极在PCB77电化学分析中的应用。 8.一种核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极对PCB77的电化学分析方法，其特征在于，分析步骤如下： (1)配制一系列不同浓度的PCB77标准溶液； (2)以权利要求1制备的核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极为工作电极，铂电极为对电极，银-氯化银电极为参比电极，将三电极置于0.1M pH为7.41的磷酸盐缓冲溶液中，将步骤(1)配制的PCB77标准溶液依次与核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极反应，采用差分脉冲伏安法记录不同浓度PCB77对应的峰电流，根据峰电流变化值与对应标准溶液中的PCB77浓度，绘制PCB77分析的标准曲线； (3)将PCB77浓度未知的待测样品加入到三电极体系中，采用差分脉冲伏安法记录待测样品对应的峰电流，代入步骤(2)制得的标准曲线中，即可得到待测样品中PCB77的浓度。 9.根据权利要求8所述的电化学分析方法，其特征在于，所述的步骤(2)中PCB77标准溶液与核酸适配体-镍铁氰纳米粒子-RGO电极反应的时间为60min。
所属类别：	发明专利