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原文传递一种基于氧化石墨烯/核酸适配体检测脑钠肽的荧光方法

专利名称：	一种基于氧化石墨烯/核酸适配体检测脑钠肽的荧光方法
摘要：	本发明提供了一种脑钠肽(BNP)的高灵敏、高选择性、低成本的均相荧光检测新方法。该方法首先通过构建氧化石墨烯/荧光染料标记的核酸适配体复合探针，利用氧化石墨烯对染料的荧光猝灭作用，降低检测的荧光背景信号；当BNP的加入与其核酸适配体通过特异性分子识别作用使荧光染料远离氧化石墨烯时，染料的荧光信号得以恢复，基于BNP浓度与荧光强度的变化建立线性工作曲线；最后通过测定加入样品后的荧光强度变化值并代入工作曲线计算得到临床样本中BNP的准确浓度。本发明方法克服了各种免疫分析法因使用抗体识别存在交叉反应的缺点，避免了相关肽等的干扰，具有简单、快速、低成本、高灵敏、高选择性等优点，并且可以用于临床上患者血液中BNP的定量检测，用以及时诊断、指导治疗及提示预后。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	重庆;50
申请人：	重庆医科大学
发明人：	张普;涂爱萍;尚京川;尹一兵;刘来成
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910383373.4
公开号：	CN110095443A
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	400016 重庆市渝中区医学院路1号
主权项：	1.一种基于氧化石墨烯/核酸适配体检测脑钠肽的荧光方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)荧光染料标记的核酸适配体探针的荧光测定：将荧光染料标记的核酸适配体探针溶液和磷酸盐缓冲液涡旋混匀后，检测混合溶液的荧光强度； (2)氧化石墨烯纳米片/荧光染料标记的核酸适配体荧光猝灭体系的构建：将荧光染料标记的核酸适配体溶液和氧化石墨烯纳米片分散液及磷酸盐缓冲液涡旋混匀后，氧化石墨烯能够通过π-π堆积吸附核酸适配体探针，形成氧化石墨烯/染料标记的核酸适配体复合物，此时染料的荧光被氧化石墨烯猝灭，检测并计算混合溶液荧光强度变化与氧化石墨烯浓度之间的关系，确定氧化石墨烯的最佳猝灭浓度； (3)氧化石墨烯纳米片/荧光染料标记的核酸适配体复合探针检测脑钠肽的线性关系建立：向由一定量的氧化石墨烯纳米片/荧光染料标记的核酸适配体溶液和磷酸盐缓冲溶液组成的混合溶液中加入脑钠肽标准溶液，涡旋混匀后，脑钠肽与核酸适配体发生特异性分子识别，核酸适配体的构象改变并脱离氧化石墨烯表面，染料的荧光信号得以恢复，检测并计算混合溶液荧光强度变化与脑钠肽浓度之间的关系，建立相应的荧光恢复线性方程； (4)氧化石墨烯纳米片/荧光染料标记的核酸适配体复合探针检测临床样本中的脑钠肽：在由一定量的氧化石墨烯纳米片/荧光染料标记的核酸适配体溶液和磷酸盐缓冲溶液组成的混合溶液中加入含脑钠肽的临床待测样本溶液，涡旋混匀后，检测其荧光强度变化值并代入步骤(3)构建的线性方程，计算得到临床样本中脑钠肽的含量。 2.根据权利要求1所述的一种基于氧化石墨烯/核酸适配体检测脑钠肽的荧光方法，其特征在于，所述方法为均相荧光测定法。 3.根据权利要求1所述的一种基于氧化石墨烯/核酸适配体检测脑钠肽的荧光方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的氧化石墨烯纳米片分散液的制备方法为：商品化的氧化石墨烯纳米片经超声分散于超纯水中，浓度为0-40μg/mL。 4.根据权利要求1所述的一种基于氧化石墨烯/核酸适配体检测脑钠肽的荧光方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的氧化石墨烯纳米片猝灭荧光染料标记的核酸适配体的最佳浓度为20μg/mL，涡旋时间为1-2min。 5.根据权利要求1所述的一种基于氧化石墨烯/核酸适配体检测脑钠肽的荧光方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的线性方程为Y＝1.787X–0.1331，r＝0.9929，对脑钠肽的检测限为0.045pg/mL；其中Y为荧光恢复效率，X为脑钠肽的浓度，单位pg/mL。
所属类别：	发明专利