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原文传递基于纳米孔膜/Au@ZIF检测8-羟基脱氧鸟苷的荧光生物传感器的制备方法

专利名称：	基于纳米孔膜/Au@ZIF检测8-羟基脱氧鸟苷的荧光生物传感器的制备方法
摘要：	一种基于纳米孔膜/Au@ZIF检测8‑羟基脱氧鸟苷(8‑OHdG)的荧光生物传感器的制备方法，以3‑(2,3‑环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(GPMS)处理的氧化铝纳米多孔膜为载体，固定碳量子点并修饰8‑OHdG抗体，碳量子点和Au@ZIF组成荧光生物传感器的供体‑受体对；8‑OHdG与抗体修饰的碳量子点和Au@ZIF结合，使得碳量子点和Au@ZIF的距离10nm以内；当碳量子点受到波长为350nm的激发光激发时，碳量子点的荧光被Au@ZIF淬灭，比较检测到8‑OHdG前后荧光强度的变化测得8‑OHdG。本发明可实现8‑OHdG的快速检测，传感器检测灵敏度高，检测下限低，特异性强。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	宁海县浙工大科学技术研究院
发明人：	叶伟伟;胡薇;张宇;孙毅
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910485343.4
公开号：	CN110208231A
代理机构：	杭州斯可睿专利事务所有限公司
代理人：	王利强
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	315600 浙江省宁波市宁海县桃源北路2号科创中心8楼
主权项：	1.一种基于纳米孔膜/Au@ZIF检测8-羟基脱氧鸟苷的荧光生物传感器的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： (1)制备以纳米孔膜为核心传感芯片的荧光生物传感器：直径为8～20mm的氧化铝纳米多孔膜，在沸腾双氧水中处理半个小时后，用去离子水清洗烘干，再用3-(2,3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷进行硅烷化处理； (2)固定8-OHdG抗体：往步骤(1)中得到的荧光生物传感器中加入碳量子点溶液150～250μL，浓度为40μg/mL，0～4℃下静置6～12h，使得碳量子点与经3-(2,3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷修饰的多孔膜上的功能基团环氧基进行反应后固定在多孔膜上；用去离子水洗涤后再加入戊二醛溶液75～125μL，浓度0.00125％，静置半小时后用去离子水洗涤，再加入8-OHdG抗体，75～125μL，浓度为1ng/mL，4℃下静置8h，将准备好的传感器放在4℃条件下备用，其中碳量子点通过水热法合成：0.44g柠檬酸与168.8μL二乙烯三胺溶于15～25mL水中，转移到50mL聚四氟乙烯衬里的不锈钢高压釜中，在180～220℃下保持4～7h，所得产物自然冷却，得到棕色透明的液体为15～25mg/mL的碳量子点溶液； (3)Au@ZIF的合成，过程如下： ZIF悬浮液的合成：Zn(NO3)2·6H2O(9.6mL，0.070M)溶液与2-甲基咪唑溶液(9.6mL，0.43M)搅拌5～10min，其中溶剂为N’N-二甲基甲酰胺，转移到50mL聚四氟乙烯衬里的不锈钢高压釜中120℃反应5～7h，用甲醇洗涤后分散在20mL甲醇中； Au-MPA的合成：HAuCl4·3H2O甲醇溶液(3.0mL，0.010M)与3-巯基丙酸(MPA)甲醇溶液(0.9mL，0.10M)混合，室温搅拌2～4h，离心后用甲醇洗涤两次，用超声将产物分散到4mL甲醇中； Au@ZIF的合成：0.5mL Au-MPA用甲醇稀释至1.0mL，加入四丁基硼氢化铵甲醇溶液(1.0mL，0.25M)，搅拌20～40min后加入2.0mL ZIF悬浮液，搅拌1～2h后离心用甲醇洗涤，将产物分散在4mL去离子水中，其中四丁基硼氢化铵甲醇溶液需在配制后5～10分钟内使用； (4)抗体修饰Au@ZIF：将Au@ZIF的溶液离心后稀释四倍制成25％Au@ZIF溶液，与0.1μg/mL的8-OHdG抗体按体积比20:1混合后4℃下静置8h； (5)向步骤(2)制得的荧光生物传感器中加入1.75nM～3500nM8-OHdG，4℃下静置4h，去离子水洗涤后测量荧光生物传感器的荧光强度，再加21μL经抗体修饰的Au@ZIF，4℃下静置4h，去离子水洗涤后测量荧光强度。
所属类别：	发明专利