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原文传递一种基于纳米酶探的脑利钠肽比色/电化学传感检测法

专利名称：	一种基于纳米酶探的脑利钠肽比色/电化学传感检测法
摘要：	本发明公开了一种制备纳米酶探针的方法，由该方法制得的纳米酶探针作为信号输出手段，提高了生物传感的灵敏度，同时也极大的提高了生物传感的速度从而使得生物传感的信号顺利输出；基于纳米酶探针构建了一种电化学传感检测方法，该方法具有极低的检测限，能检测低至fg级的微量BNP，体现了高度的特异性和灵敏性，适合临床与科学研究；基于纳米酶探针构建了一种比色化学传感的检测方法，具有极快的传感时间和便捷操作，快速简单的检测BNP，适合家庭使用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海大学
发明人：	陈红霞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910389628.8
公开号：	CN110208347A
代理机构：	上海旭诚知识产权代理有限公司
代理人：	郑立
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	200072 上海市宝山区上大路99号
主权项：	1.一种制备纳米酶探针的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)将PADS溶液加入到HAuCl4水溶液中形成混合溶液，按照质量比，PADS溶液∶HAuCl4溶液为3.0～5.0∶1.0～2.0，HAuCl4水溶液中HAuCl4的质量分数为1％； (2)将所述混合溶液冷却回流5～20分钟后，冷却至室温，获得氨基表面修饰的AuNPs为N-AuNPs； (3)将250～350μL pH＝10～13的Hemin溶液、50～150μL吐温溶液、10～25mg EDC和0.2～1mg SH-PEG加入到10～15mL N-AuNPs溶液中，闭光孵育1～5小时后，将反应溶液离心10～30分钟，然后将颗粒物Hemin-AuNPs重悬于超纯水中，得到Hemin-AuNPs溶液； (4)将所述Hemin-AuNPs溶液和靶标蛋白溶液按照体积比9∶1混合，置于30～45℃下孵育5～8小时，反应完成后离心10～30分钟，然后将获得物靶标蛋白-Hemin-AuNPs重悬于超纯水中，以获得靶标蛋白-Hemin-AuNPs的纳米酶探针的溶液。 2.如权利要求1所述的制备纳米酶探针的方法，其中，步骤(1)中按照质量比，PADS溶液∶HAuCl4溶液为5.0∶1.0，所述PADS溶液的浓度为14mg·mL-1，步骤(3)中Hemin溶液浓度为1mM，pH＝11，步骤(4)中靶标蛋白为脑利钠肽。 3.一种基于纳米酶探针的脑利钠肽比色传感的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： (a)在待测溶液中，加入如权利要求1的所述的纳米酶探针的溶液和脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs溶液形成混合物，将所述混合物在37℃反应20～40分钟，经过磁分离，取出所述混合物的上清液待测； (b)向所述上清液中加入过氧化氢溶液和ABTS溶液，在30～42℃下充分反应，待反应完全后使用UV-vis检测。 4.如权利要求3所述的脑利钠肽比色传感的检测方法，其中，制备脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs的方法为在超声波处理下将0.22M EDC溶液、0.22M NHS溶液与10mg/mL MNPs溶液混合15～30分钟，磁分离后，去除第一上清液，使用超纯水洗涤后重悬MNPs为MNPs溶液，将0.4mM脑利钠肽抗体溶液加入到所述MNPs溶液中，连续搅拌60～150分钟，磁分离后，去除第二上清液，使用超纯水洗涤沉淀后重悬MNPs为溶液，获得脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs溶液。 5.如权利要求3所述的脑利钠肽比色传感的检测方法，其中，步骤(a)中按照体积比，待测溶液∶纳米酶探针溶液∶脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs溶液为10∶1∶1，步骤(b)中按照体积比，上清液∶过氧化氢溶液∶ABTS溶液为8∶1∶1。 6.一种基于纳米酶探针的脑利钠肽电化学传感的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： (i)取待测溶液，加入脑利钠肽抗体功能化修饰的MNPs溶液和如权利要求1所述的纳米酶探针的溶液形成混合物溶液，将裸磁性金电极浸没在所述混合物溶液中，在37℃反应15～40分钟； (ii)取出反应后的磁性电极，使用电化学工作站以三电极体系进行测试，工作电极为磁性金电极，对电极为铂电极，参比电极饱选用甘汞电极，采用循环伏安法和电化学阻抗谱表征电极表面修饰，采用差分脉冲伏安法进行电化学检测。 7.如权利要求6所述的脑利钠肽电化学传感的检测方法，其中，步骤(ii)中循环伏安法的扫描电位范围为-0.7V至0.7V，扫描速率为50mV·s-1；电化学阻抗谱的扫描频率为0.1Hz至100kHz，振幅为5mV；差分脉冲伏安法的扫描电位范围为-0.7至0.7V，扫描速率为0.001V·s-1，脉冲振幅50mV，脉冲周期200ms。 8.如权利要求6所述的脑利钠肽电化学传感的检测方法，其中，步骤(ii)中循环伏安法和电化学阻抗谱中所用到的电解液包括5mM K3[Fe(CN)6]3-/4-溶液和0.1M KCl；差分脉冲伏安法所用到的溶液包括10mM H2O2、10mM MB和0.1M PBS缓冲溶液，pH＝8。 9.一种纳米酶探针，其特征在于，包括Hemin-AuNPs纳米酶和靶标蛋白，所述靶标蛋白被设置为偶联至所述Hemin-AuNPs纳米酶上，所述Hemin-AuNPs纳米酶含有Hemin和AuNPs，所述Hemin和AuNPs通过共价键连接。 10.如权利要求9所述的纳米酶探针，其中，靶标蛋白为脑利钠肽。
所属类别：	发明专利