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原文传递鹅细小病毒VP3蛋白抗原ELISA检测试剂盒及检测方法和应用

专利名称：	鹅细小病毒VP3蛋白抗原ELISA检测试剂盒及检测方法和应用
摘要：	本发明公开了一种鹅细小病毒VP3蛋白抗原ELISA检测试剂盒及检测方法。所述试剂盒中包括：包被鹅细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体的酶标板、封闭液、样品稀释液、纯化的鹅细小病毒VP3重组蛋白抗原标准品、HRP标记的抗鹅细小病毒VP3单克隆抗体、洗涤液、酶底物A溶液、酶底物B溶液、终止液以及抗原标准品。同时，本发明还公开了一种采用所述试剂盒准确定量检测样品中的鹅细小病毒VP3蛋白抗原的方法。本发明的试剂盒除具有ELISA试剂盒的优点外，还克服了抗原空间构象问题所致的特异性低和二抗问题所致的灵敏度等缺陷，显著提高了检测的特异性和灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	扬州优邦生物药品有限公司
发明人：	阮菁;丁国伟;魏荣荣;许兆君;杨豫蒙;范娟;潘杰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910484180.8
公开号：	CN110174516A
代理机构：	北京轻创知识产权代理有限公司
代理人：	王佳妹
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	225000 江苏省扬州市维扬经济开发区金槐路7号
主权项：	1.一种鹅细小病毒VP3蛋白抗原ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：包被鹅细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体的酶标板、封闭液、样品稀释液、抗原标准品、HRP标记的抗鹅细小病毒VP3单克隆抗体、洗涤液、酶底物A溶液、酶底物B溶液以及终止液，其中，所述抗原标准品为纯化的重组杆状病毒表达的形成病毒样颗粒(VLPs)的鹅细小病毒VP3蛋白。 2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述鹅细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体的包被量为0.01μg-0.5μg/孔。 3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述封闭液选自质量浓度为1-10％的牛血清白蛋白(BSA)或质量浓度为1-10％的脱脂奶粉的任一或其组合。 4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，样品稀释液由质量浓度为0.1-10％BSA和含有0.01-1％ProClin 300的磷酸盐缓冲液组成，其中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH7.2-7.4。 5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述酶底物A溶液含有质量浓度为0.016％的双氧水的乙酸钠缓冲溶液，其中，乙酸钠溶液的浓度为10g/L，pH为5.3；所述酶底物B溶液为1.7mmol/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐溶液；所述终止液为1mol/L的H2SO4溶液。 6.一种使用权利要求1-5任一所述的试剂盒检测鹅细小病毒VP3蛋白抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)将待检样品用样品稀释液按梯度稀释，将其加入包被抗鹅细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体的酶标板中，每孔加100μL，同时设置阳性对照组、阴性对照组和空白对照组，其中阳性对照组加入原液、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128系列稀释的抗原标准品各100μL，阴性对照组加入100μL阴性对照液，空白对照组加入100μL样品稀释液，每个试样和对照平行加样2-6个孔； (2)加样完成后，将酶标板置37℃孵育1小时后，洗涤液洗板3-5次，甩干； (3)每孔加入100μL HRP标记的抗鹅细小病毒VP3单克隆抗体，37℃育1小时，洗涤液洗板3-5次，甩干； (4)每孔加入100μL显色液，避光显色5-10分钟后，每孔再加入50μL终止液，其中，所述的显色液由酶底物B溶液和酶底物A溶液等体积混匀制得； (5)将酶标板置于酶标仪中，在450nm测定其光吸收值OD450nm； (6)结果计算与判定。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)包括定性结果或定量结果的判定，其中所述定性结果的判定：Cut off(CO值)＝阴性对照光吸收值OD450nm×2.1倍，样品值＝样品光吸收值OD450nm/CO值，其中，样品值>1为阳性；样品值≤1为阴性；或者，定量结果的判定：以线性曲线及方程式计算样品浓度。 8.权利要求1-5任一所述试剂盒在检测鹅细小病毒感染或者小鹅瘟疫苗产品的应用。
所属类别：	发明专利