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原文传递利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法

专利名称：	利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法
摘要：	本发明公开了一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，包括以下步骤：S1：筛选发光蚯蚓并在净化培养基中进行净化1天；S2：将净化后的发光蚯蚓平均分为三组，利用发光检测体系提取每组发光蚯蚓分泌的粘液，利用荧光分光光度计检测并记录初始荧光值；S3：在污染土壤区域取样，分为三个实验组，每个实验组的污然土壤内放入一组发光蚯蚓，培育3‑4天；S4：取出各个实验组中的发光蚯蚓，利用发光检测体系提取每组发光蚯蚓分泌的粘液，利用荧光分光光度计检测并记录最终荧光值；S5：计算每组平均抑光率，根据平均抑光率划分污染土壤样本的生态毒性等级。本发明具有检测方便，准确率高等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	生态环境部南京环境科学研究所
发明人：	冯艳红;张亚;王国庆;应蓉蓉;郑丽萍;杜俊洋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910494142.0
公开号：	CN110221041A
代理机构：	北京栈桥知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	刘亚娟
分类号：	G01N33/24(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	210042 江苏省南京市玄武区蒋王庙街8号
主权项：	1.一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：筛选发光蚯蚓并在净化培养基中进行净化1天； S2：将净化后的发光蚯蚓利用纯水进行清洗，平均分为三组，每组8-10条，利用发光检测体系提取每组发光蚯蚓分泌的粘液，利用荧光分光光度计检测并记录初始荧光值； S3：在污染土壤区域取样，初步筛分后，分为三个实验组，每个实验组的污然土壤内放入一组发光蚯蚓，调节环境参数，培育3-4天； S4：取出各个实验组中的发光蚯蚓，清洗干净后，利用发光检测体系提取每组发光蚯蚓分泌的粘液，利用荧光分光光度计检测并记录最终荧光值； S5：计算对应的实验组的初始荧光值和最终荧光值的差值，利用差值除以初始荧光值得到每组的抑光率再求平均抑光率，根据平均抑光率划分污染土壤样本的生态毒性等级。 2.如权利要求1所述的一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，其特征在于，S1中所述发光蚯蚓为陆正蚓、安德爱盛蚓或腹枝蚓中的一种或任意几种。 3.如权利要求1所述的一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，其特征在于，S1中所述发光蚯蚓的筛选标准为：选择来自同一生长环境，无伤残，个体均匀，蚯龄小于或等于4周的蚯蚓进行实验。 4.如权利要求1所述的一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，其特征在于，S1中所述净化培养基按照质量百分比计包括：1-3％小分子肽、3-6％亚油酸、5-7％葡萄糖、0.7-0.9％NaCl、0.5-1.5％复合维生素粉，余量为无菌纸浆。 5.如权利要求1所述的一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，其特征在于，S1和S4中所述发光检测体系包括：2-5mg碳酸钙、2-4mg七水硫酸镁、2-6ml双氧水、50-60ml甲醇、300-500ml磷酸缓冲液。 6.如权利要求5所述的一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，其特征在于，利用所述发光检测体系检测发光蚯蚓荧光值的方法包括以下步骤： 1)以每组发光分蚯蚓为单元分别放入培养皿中，加入2-5mg碳酸钙、2-4mg七水硫酸镁以及100ml磷酸缓冲液作为溶液A，使发光蚯蚓浸润在溶液A中，每隔30s通入0.5-2mA电流5s，10min后取出发光蚯蚓； 2)利用镊子逐条夹取步骤1)处理后的发光蚯蚓，将其表面的残余液体均匀涂抹在载玻片上； 3)在每片含有残余液体的载玻片表面上滴加2-3ml的甲醇，并涂抹均匀，固定停留10-20min，利用剩余的磷酸冲液冲洗干净，收集冲液记为溶液B； 4)将每组的溶液A和溶液B进行混合，加入2-6ml双氧水，促进发光显色，最红利用荧光分光光度计检测初始荧光值或最终荧光值。 7.如权利要求1所述的一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，其特征在于，S3中所述环境参数为：温度为20-25℃，湿度为60-80％，pH为6.8-7.3，含氧量为8-10％，避光。 8.如权利要求7所述的一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，其特征在于，S3中所述环境参数为：温度为20-25℃，湿度为60-80％，pH为6.8-7.3，含氧量为8-10％，避光。 9.如权利要求1所述的一种利用发光蚯蚓进行重金属污染土壤生态毒性检测的方法，其特征在于，S5中所述生态毒性等级的划分标准为：当平均抑光率<45％，毒性为低毒，等级为三级；当所述45≦平均抑光率≦80％，毒性为中毒，等级为二级；当平均抑光率>80％，毒性为高毒，等级为一级。
所属类别：	发明专利