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原文传递一种用于检测曲霉菌的胶体金试纸卡及试剂盒

专利名称：	一种用于检测曲霉菌的胶体金试纸卡及试剂盒
摘要：	本发明公开了一种用于检测曲霉菌的胶体金试纸卡及试剂盒，试剂盒包括胶体金试纸卡，试纸卡包括胶板，胶板沿样品流动方向设有端头依次连接的样品垫、金标垫、硝酸纤维膜和吸水垫，金标垫吸附有胶体金标记的金标抗体，硝酸纤维膜沿样品流动方向设有检测T区和质控C区，检测T区包被有捕获抗体，质控C区包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体；金标抗体是用曲霉菌半乳甘露聚糖半抗原偶联卵白蛋白免疫小鼠后收集的脾细胞经杂交制备的杂交瘤细胞所分泌；捕获抗体是通过曲霉菌半乳甘露聚糖半抗原偶联卵白蛋白免疫动物后所得。本发明胶体金试纸卡及试剂盒能准确用于临床上曲霉菌的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州爱康生物技术有限公司
发明人：	刘灵辉;赖演媚;赖柔贝
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910431793.5
公开号：	CN110146701A
代理机构：	广州三环专利商标代理有限公司
代理人：	颜希文;孙超
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510000 广东省广州市黄埔区瑞和路39号自编号G1座301-307
主权项：	1.一种用于检测曲霉菌的胶体金试纸卡，其特征在于，所述试纸卡包括胶板，胶板沿样品流动方向设有端头依次连接的样品垫、金标垫、硝酸纤维膜和吸水垫，所述金标垫吸附有胶体金标记的抗体，硝酸纤维膜沿样品流动方向依次设有检测T区和质控C区，所述检测T区包被有捕获抗体，所述质控C区包被有羊抗鼠多克隆抗体；所述捕获抗体是通过以下方法进行制备： S11)培养曲霉菌至菌浓度达到对数后期，离心收集总菌体，重新悬浮并裂解菌体； S12)依次采用乙醇和CTAB沉淀曲霉菌半乳甘露聚糖半抗原，再采用过碘酸钠法将曲霉菌半乳甘露聚糖半抗原和卵白蛋白进行偶联，即得到曲霉菌抗原； S13)将曲霉菌抗原与弗氏佐剂进行混合，乳化后免疫新西兰兔； S14)从免疫后新西兰兔中取血，离心收集血清；对血清采用饱和硫酸铵盐析法沉淀抗曲霉菌抗体； S14)将抗曲霉菌抗体溶解于PBS缓冲液中，再进行透析和亲和层析，纯化后的抗曲霉菌抗体的效价比≥1:5000；所述金标抗体是通过以下方法进行制备： S21)将步骤S12制备的曲霉菌抗原与弗氏佐剂进行混合，乳化后免疫小鼠； S22)从免疫后小鼠中取脾细胞，并制成脾细胞悬液； S23)将脾细胞悬液和骨髓瘤细胞进行混合，诱导形成杂交瘤细胞； S24)筛选合格的杂交瘤细胞并进行克隆化培养，从杂交瘤细胞的培养液中收集上清并用于亲和层析，纯化后的抗曲霉菌单克隆抗体的纯度≥90％。 2.如权利要求1所述的胶体金试纸卡，其特征在于，所述样品垫采用第一缓冲液进行浸泡、烘干预处理，所述第一缓冲液为甘氨酸缓冲液、Tris-Cl缓冲液、硼酸盐缓冲液、磷酸缓冲液或柠檬酸缓冲液，第一缓冲液的浓度为10～100mM，所述第一缓冲液还包含5～100g/L表面活性剂、0.2g/L氯化钠和2g/L甘氨酸，所述表面活性剂至少为PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000、Triton X-100、Triton X-305、Tween-20、Tween-60、Tween-80和SPAN-20中的一种。 3.如权利要求1所述的胶体金试纸卡，其特征在于，所述金标垫采用第二缓冲液进行浸泡、烘干预处理，所述第二缓冲液为甘氨酸缓冲液、Tris-Cl缓冲液、硼酸盐缓冲液、磷酸缓冲液或柠檬酸缓冲液，所述第二缓冲液的浓度为10～100mM，所述第二缓冲还包含5～100g/L表面活性剂、0.2g/L氯化钠和2g/L甘氨酸，所述表面活性剂至少为PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000、Triton X-100、Triton X-305、Tween-20、Tween-60、Tween-80和SPAN-20中的一种。 4.如权利要求1所述的胶体金试纸卡，其特征在于，所述胶体金标记的金标抗体是通过以下方法进行制备：采用0.04mg/mL金标抗体包被胶体金，离心分离出游离的胶体金；再用第三缓冲液悬浮已经标记好的金标抗体，所述第三缓冲液为含1mg/mL PEG6000、5％(w/v)蔗糖的10mM、pH7.2磷酸缓冲液。 5.如权利要求1所述的胶体金试纸卡，其特征在于，所述金标垫按4μL/cm2喷涂100mg/mL胶体金标记的金标抗体溶液，所述检测T区按1μL/cm2喷涂0.5mg/mL捕获抗体溶液，所述质控C区按1μL/cm2喷涂0.5mg/mL羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液。 6.一种包含如权利要求1～5任一项所述的胶体试纸卡的试剂盒，所述试剂盒还包含卡壳，卡壳包括背卡和上盖，背卡设有卡槽，所述胶体试纸卡镶嵌于所述卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测T区和质控C区的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。 7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含样品稀释液，所述样品稀释液为甘氨酸液缓冲液、Tris-Cl缓冲液、硼酸盐缓冲液、磷酸缓冲液或柠檬酸缓冲液，所述样品稀释液的浓度为10～100mM；所述样品稀释液还包含50～300mM氯化钠、表面活性剂和0.1％～5％BSA(w/v)或包含50～300mM氯化钠、表面活性剂和0.1％～5％酪蛋白(w/v)，所述表面活性剂至少为PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000、Triton X-100、Triton X-305、Tween-20、Tween-60、Tween-80和SPAN-20中的一种。
所属类别：	发明专利