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原文传递一种银翘解毒口服液的质量检测方法

专利名称：	一种银翘解毒口服液的质量检测方法
摘要：	本发明公开了一种银翘解毒口服液的质量检测方法。该银翘解毒口服液的质量检测方法，通过对金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗的成分鉴定及对绿原酸和牛蒡苷的含量测定，建立了银翘解毒口服液的薄层色谱鉴别(TLC)和高效液相色谱(HPLC)含量测定方法，专属性强、色谱斑点清晰、阴性对照无干扰，可快速确定制剂中金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗的存在；所建立的HPLC测定法，精确性、稳定性、重复性良好，可快速准确地测定出制剂中绿原酸、牛蒡苷的含量，可对银翘解毒口服液的质量进行有效控制。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东省农业科学院家禽研究所
发明人：	赵增成;刘月月;林树乾;李颖;杨世发;李桂明;黄中利;傅剑;宋敏训;殷斌
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910044728.7
公开号：	CN110187044A
代理机构：	济南千慧专利事务所(普通合伙企业)
代理人：	商福全
分类号：	G01N30/90(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	250023 山东省济南市天桥区交校路1号
主权项：	1.一种鉴定银翘解毒口服液的方法，其特征在于，所述方法包括对银翘解毒口服液中的金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草、桔梗中的一种或任意几种成分进行鉴定的步骤，具体包括如下步骤： (1)金银花的薄层色谱鉴别方法：制备金银花对照药材溶液、绿原酸对照品溶液和供试品溶液；照薄层色谱法试验，吸取绿原酸对照品溶液、金银花对照药材溶液和供试品溶液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以体积比为9:1:0.5的异丙醇-甲醇-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与绿原酸对照品色谱、金银花对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点； (2)连翘的薄层色谱鉴别方法：制备连翘对照药材溶液、连翘苷对照品溶液和供试品溶液；照薄层色谱法试验，吸取连翘苷对照品溶液、连翘对照药材溶液和供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板，以体积比为40:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与连翘苷对照品色谱、连翘对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点； (3)牛蒡子的薄层色谱鉴别方法：制备牛蒡子对照药材溶液、牛蒡苷对照品溶液和供试品溶液；照薄层色谱法试验，吸取牛蒡苷对照品溶液5μL、牛蒡子对照药材溶液10μL，供试品溶液5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板，以体积比为50:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与牛蒡苷对照品色谱和牛蒡子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (4)薄荷、荆芥的薄层色谱鉴别方法：制备胡薄荷酮对照品溶液、薄荷脑对照品溶液、薄荷和荆芥对照药材溶液和供试品溶液；照薄层色谱法试验，吸取胡薄荷酮对照品溶液2μL，薄荷脑对照品溶液5μL，薄荷和荆芥对照药材溶液20μL，供试品溶液20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为19:1:2的石油醚-三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出晾干，喷以体积比为1:4的香草醛硫酸试液-乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胡薄荷酮和薄荷脑对照品色谱、薄荷和荆芥对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (5)甘草的薄层色谱鉴别方法：制备甘草对照药材溶液和供试品溶液；照薄层色谱法试验，取甘草对照药材溶液、供试品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40:10:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将薄层板置充满饱和展开剂蒸汽的展开缸中预饱和15min，展开，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (6)桔梗的薄层色谱鉴别方法：制备桔梗对照药材溶液和供试品溶液；照薄层色谱法试验，取桔梗对照药材溶液、供试品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:5:0.5:0.35的石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸-甲酸为展开剂，展开，展距12cm，取出晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与桔梗对照品色谱和桔梗对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 2.根据权利要求1所述的银翘解毒口服液的鉴别方法，其特征在于： (1)金银花的薄层色谱鉴别方法中，金银花对照药材溶液的制备方法为：取金银花对照药材0.5g，加水50mL，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加1mL丙酮溶解，作为金银花对照药材溶液；绿原酸对照品溶液的制备方法为：取绿原酸对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为绿原酸对照品溶液；供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加丙酮20mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加丙酮2mL溶解，作为供试品溶液； (2)连翘的薄层色谱鉴别方法中，连翘对照药材溶液的制备方法为：取连翘对照药材0.4g，加水40ml，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为连翘对照药材溶液；连翘苷对照品溶液的制备方法为：取连翘苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.3mg的溶液，作为连翘苷对照品溶液；供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液； (3)牛蒡子的薄层色谱鉴别方法中，牛蒡子对照药材溶液的制备方法为：取牛蒡子对照药材0.4g，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为牛蒡子对照药材溶液；牛蒡苷对照品溶液的制备方法为：取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每1mL含5mg的溶液，作为牛蒡苷对照品溶液；供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，加2g粒径为100～200目的中性氧化铝混匀，过内径为1～1.5cm、质量为5g、粒径为100～200目的中性氧化铝柱，用体积分数80％乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，取上清液作为供试品溶液； (4)薄荷、荆芥的薄层色谱鉴别方法中，薄荷和荆芥对照药材溶液的制备方法为：取薄荷对照药材3g、荆芥对照药材2g，置圆底烧瓶中，加水200mL，照挥发油测定法自测定器上端加水充满至刻度部分，加乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管，加热微沸2h，放冷，取乙酸乙酯层，另用2mL乙酸乙酯冲洗测定器，将冲洗液与取出的乙酸乙酯层合并，自然挥干，残渣用甲醇0.5mL溶解，作为薄荷和荆芥对照药材溶液；胡薄荷酮对照品溶液的制备方法为：取胡薄荷酮对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为胡薄荷酮对照品溶液；薄荷脑对照品溶液的制备方法为：取薄荷脑对照品，加甲醇制成每1mL含5mg的溶液，作为薄荷脑对照品溶液；供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液80mL，加水40mL，混匀，照挥发油测定法自测定器上端加水充满至刻度部分，加乙酸乙酯2mL，连接回流冷凝管，加热微沸2h，放冷，取乙酸乙酯层，另用2mL乙酸乙酯冲洗测定器，合并乙酸乙酯层，自然挥干，用甲醇1mL溶解，作为供试品溶液； (5)甘草的薄层色谱鉴别方法中，甘草对照药材溶液的制备方法为：取甘草对照药材0.4g，加水30mL，置沸水浴0.5h，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为甘草对照药材溶液；供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液15mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇25mL，充分搅拌后超声20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液； (6)桔梗的薄层色谱鉴别方法中，桔梗对照药材溶液的制备方法为：取桔梗对照药材2g，加体积比为1:3的7％硫酸乙醇-水混合溶液40mL，加热回流3h，放冷，加氯仿萃取3次，每次加氯仿20mL，每次取氯仿层，合并3次的氯仿层，加水洗涤两次，每次加水40mL，弃去水层，加无水硫酸吸水，过滤，滤液置水浴上蒸干，加甲醇1mL溶解，作为桔梗对照药材溶液；供试品溶液的制备方法为：取所述银翘解毒口服液20mL，加体积比为1:3的7％硫酸乙醇-水的混合溶液40mL，加热回流3h，放冷，加氯仿萃取3次，每次加氯仿25mL，每次取氯仿层，合并3次的氯仿层，加水洗涤两次，每次加水50mL，每次弃去水层，加无水硫酸吸水，过滤，滤液置水浴上蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。 3.一种银翘解毒口服液的含量测定方法，其特征在于：银翘解毒口服液中所含绿原酸和牛蒡苷的含量测定，包括如下步骤： (1)混合对照品溶液的制备：分别称取绿原酸和牛蒡苷为对照品，以甲醇为溶剂，制得绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液；绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液中绿原酸浓度为40μg/mL、牛蒡苷浓度为50μg/mL； (2)供试品溶液的制备：取银翘解毒口服液2mL，置100mL量瓶中，加入50％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀； (3)确定色谱条件：色谱柱：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温35℃，流速1mL/min，流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液-甲醇，梯度洗脱；乙腈、0.2％磷酸水溶液、甲醇流动相分别记作A、B、C； (4)测定：分别吸取绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪中，在波长327nm下，测定绿原酸的峰面积；在波长276nm下，测定牛蒡苷的峰面积，理论板数按绿原酸峰、牛蒡苷峰计算均应不低于1000；根据峰面积分别计算绿原酸和牛蒡苷的含量。 4.根据权利要求3所述的银翘解毒口服液的含量测定方法，其特征在于：步骤(1)中，绿原酸和牛蒡苷的混合对照品溶液中绿原酸浓度为40μg/mL、牛蒡苷浓度为50μg/mL。 5.根据权利要求3所述的银翘解毒口服液的含量测定方法，其特征在于：步骤(3)中梯度洗脱程序为：0～9min，10％A-84％B-6％C，10～25min，23％A-71％B-6％C，26～40min，10％A-84％B-6％C。 6.根据权利要求3所述的银翘解毒口服液的含量测定方法，其特征在于：绿原酸的峰面积的测定波长为327nm，牛蒡苷的峰面积的测定波长为276nm。 7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，所述银翘解毒口服液采用如下方法制备得到： (1)蒸馏提取薄荷和荆芥的有效成分，取薄荷饮片、荆芥饮片，加7-9倍薄荷饮片和荆芥饮片药量的水浸泡0.5-1小时后，蒸馏1-1.5小时，得挥发油、煎煮液和药渣； (2)将步骤(1)得到的药渣与其余的几种原料混合后，浸泡1.5-2.5小时后进行煎煮，每次煎煮加9-11倍药量的水，共煎煮3次，每次煎煮1-2小时，每次煎煮后分离得到煎煮液和药渣，将三次煎煮液与步骤(1)得到的煎煮液混合，滤过，减压浓缩至相对密度为1.05-1.20，浓缩液静置10-12小时，分离上清液，滤过，得滤液； (3)将步骤(2)得到的滤液与步骤(1)得到的挥发油合并，加入0.1％-0.2％的表面活性剂，搅匀，加水定容至1mL药液相当于生药1g； (4)加入0.2％％-0.3％的防腐剂苯甲酸钠，搅匀，即得该银翘解毒口服液；该银翘解毒口服液的活性成分由以下重量份数的原料制成：金银花175-185份、连翘175-185份、薄荷105-110份、荆芥65-75份、淡豆豉85-95份、牛蒡子105-115份、桔梗100-110份、淡竹叶65-75份和甘草85-95份。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：包括如下步骤： (1)蒸馏提取薄荷和荆芥的有效成分，取薄荷饮片、荆芥饮片，加8倍薄荷饮片和荆芥饮片药量的水浸泡0.5小时后，蒸馏1小时，得挥发油、煎煮液和药渣； (2)将步骤(1)得到的药渣与其余的几种原料混合后，浸泡2小时后进行煎煮，每次煎煮加10倍药量的水，共煎煮3次，每次煎煮1.5小时，每次煎煮后分离得到煎煮液和药渣，将三次煎煮液与步骤(1)得到的煎煮液混合，滤过，减压浓缩至相对密度为1.10，浓缩液静置12小时，分离上清液，滤过，得滤液； (3)将步骤(2)得到的滤液与步骤(1)得到的挥发油合并，加入0.1％的聚山梨酯80，搅匀，加水定容至1mL药液相当于生药1g； (4)加入0.3％的防腐剂苯甲酸钠，搅匀，即得该银翘解毒口服液；该银翘解毒口服液的活性成分由以下重量份数的原料制成：金银花179份、连翘179份、薄荷107份、荆芥71份、淡豆豉89份、牛蒡子107份、桔梗107份、淡竹叶71份和甘草90份。
所属类别：	发明专利