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原文传递一种快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒及其检测方法

专利名称：	一种快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明属于时间分辨荧光免疫分析技术领域，公开了一种快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒及其检测方法，快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒包括：测试反应杯；校准品反应杯；空白对照培养管，其内含有抗凝血物质；测试培养管；阳性对照培养管，其内含有抗凝血物质和细胞凝集素；实验缓冲液以及浓缩洗液；本发明还公开了快速时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法。本发明的试剂盒采用了γ‑干扰素体外释放法，联合采用了生物素亲和素法，双抗体夹心时间分辨荧光免疫法，实验方法简单快速，可自动化操作,检测系统为开放式操作系统。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州市丰华生物工程有限公司
发明人：	谭玉华;江燚
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910592759.6
公开号：	CN110221063A
代理机构：	北京华智则铭知识产权代理有限公司
代理人：	王昌贵
分类号：	G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510730 广东省广州市经济技术开发区银谊街6号
主权项：	1.一种快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒的检测方法包括：采用时间分辨荧光免疫分析设备进行荧光值计数；所述时间分辨荧光免疫分析设备的探测器利用全反射技术进行最低探测限的测定，测量系统的最低探测限由如下公式计算：MDL＝3(Ib/t)1/2M/I；MDL是本底计数率，t为测量计数时间，M为被测量元素质量，l代表被测量元素产生的特征峰净计数率，S＝I/M就是系统灵敏度。 2.如权利要求1所述的快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述时间分辨荧光免疫分析设备包括X光管、内套、滤光片、内套座、压片、探测器、保护器；所述X光管一端镶嵌在内套座上，内套座与探测器通过导线连接，保护器通过导线连接探测器；内套镶嵌在内套座内部，滤光片固定在内套上，压片位于内套和探测器之间并固定在内套上；被测样品设置在内套上；所述内套底部设置有方孔，方孔设置为准直器；内套与内套座设置有通孔；所述的探测器具体采用X射线检测器和固定夹子组合，X射线检测器设置光纤和导光单元，导光单元由固定材料固定于探测器主体内，固定材料形成于导光单元的周围的至少一部分，导光单元的至少一部分由玻璃形成，固定材料是氟系树脂材料、四氟乙烯-全氟间二氧环戊烯聚合物和氟硅橡胶或折射率比导光单元的折射率低的低折射率硅酮树脂或甲基系硅酮树脂，导光单元的光出射端由固定材料覆盖；保护器包括拼合件、保护器主体和遮挡盖，拼合件具有基本管形，以对至少部分覆盖被保持于拼合件之间的电线的至少一个波纹管进行保持，拼合件包括一个或两个肋、波纹管，一对肋包括竖立端，竖立端被弯曲以沿着波纹管的凹槽彼此靠近，设置轴线沿着拼合件的纵向方向延伸的一个或多个支承轴部分，设置在肋的竖立端的基端处或附近，和/或肋通过支承轴部分与一个或两个拼合件的外围壁相连续，拼合件能够与安装在线束上的至少一个波纹管相接合，拼合件设置安装凹槽、膨胀板、接合支腿和弹性板，膨胀板具有基本正方形，接合支腿包括至少一个突出部分，当膨胀板至少部分插入容纳部分中时，能够与膨胀板相协作而夹入导引板，多个突出部分与膨胀板相协作而夹入导引板，弹性板在拼合件的内部位置处基本沿着拼合件的周向表面延伸，弹性板的表面设置有突出的表面和支线部分的外表面基本彼此齐平保护器主体具有拼合件、底壁、间隔壁和从该底壁竖立成为彼此相对的一对竖立壁，底壁的内表面和一对竖立壁的内表面形成收纳槽，在收纳槽中收纳有一根或多根电缆，遮挡盖与保护器主体接合以便覆盖收纳槽。 3.如权利要求2所述的快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒的检测方法，其特征在于，导光单元包括对从光源出射的光进行传导的第一导光构件和使由第一导光构件传导的光扩散并传导至X射线检测器附近的第二导光构件，第二导光构件在光从第一导光构件入射的光入射侧包括使入射光扩散的光扩散构件，第一导光构件和第二导光构件中至少第二导光构件由固定材料固定，第一导光构件和第二导光构件中仅第二导光构件由固定材料固定，固定夹子包括具有远端和近端的长形构件，固定夹子还包括至少一个安装在长形构件的远端处的相对构件和壳体，相对构件被布置为在长形构件与相对构件之间夹紧探测器的一部分，相对构件从长形构件的远端朝向长形构件的近端延伸，相对构件通过横贯构件连接至长形构件，横贯构件被布置为在使用中接合探测器的一部分的上部边缘，相对构件被朝向长形构件而弹性地偏置，壳体在长形构件的与相对构件相反的一侧被安装至长形构件，所述壳体被围绕横向于长形构件的纵向方向的轴线而枢转地安装至长形构件，壳体相对于长形构件可滑动地安装，用于阻止壳体与长形构件的相对滑动的制动装置，制动装置包括齿条和棘爪。 4.如权利要求2所述的快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒的检测方法，其特征在于，保护器主体还具有突起条，突起条从底壁的内表面朝遮挡盖突出，形成在所述一对竖立壁之间以便沿与一对竖立壁相交的方向延伸，在突起条中的每一个与一对竖立壁之间的边界部分中，突起条在排出方向上延伸横跨底壁的内表面，排出方向与一根或多根电缆的布设方向和垂直于布设方向的方向中的每一个方向相交，间隔壁从底壁竖立，并布置在所述一对竖立壁之间，与一对竖立壁相对，突起条具有形成在一对竖立壁中的一个竖立壁与间隔壁之间的第一突起条和形成在一对竖立壁中的另一个竖立壁与间隔壁之间的第二突起条，在第一突起条中的每一个与一个竖立壁相邻的边界部分和第一突起条与间隔壁相邻的边界部分中。 5.如权利要求1所述的快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒的检测方法，其特征在于，干燥为50～70℃热风下干燥30～40s。 6.如权利要求1所述的快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒的检测方法，其特征在于，采用时间分辨荧光免疫分析设备进行荧光值计数前需进行：第一步，分别向空白对照培养管、测试培养管和阳性对照培养管三种培养管中加入样本，并颠倒数次使样本与三种培养管中的内容物混匀；第二步，将加有样本的三种培养管置于35～38℃下直立培养16～24小时；第三步，培养结束后，通过离心将三种培养管的样本的组织分离；第四步，向校准品反应杯中预设的含有不同浓度的校准品的孔内分别加入实验缓冲液，并将第三步中分离的样本中的组织及实验缓冲液加入测试反应杯中；第五步，将校准品反应杯和测试反应杯在30～40℃下，振荡孵育5～20min。 7.如权利要求6所述的快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述第三步中，3000～5000r/min转速下离心10～20min。 8.一种实施权利要求1所述快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒包括：测试反应杯，内包被有链霉亲和素以及结合在链霉亲和素上的生物素化γ-干扰素单克隆抗体，并含有镧系元素标记的γ-干扰素单克隆抗体；校准品反应杯，内包被有链霉亲和素以及结合在链霉亲和素上的生物素化γ-干扰素单克隆抗体，并含有铕标记γ-干扰素单克隆抗体及不同浓度的校准品；空白对照培养管，内含有抗凝血物质；测试培养管，内含有抗凝血物质和能够刺激结核分枝杆菌抗原特异性T细胞产生γ-干扰素的刺激物，刺激物为结核分枝杆菌的抗原及其衍生的抗原表位肽和它们的类似物中的至少一种；阳性对照培养管，内含有抗凝血物质和细胞凝集素；实验缓冲液；浓缩洗液。 9.如权利要求8所述的快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述刺激物为结核分枝杆菌Rv0733、Rv1978、Rv1980c、Rv1981c、Rv1984c、Rv1985c、Rv2654c、Rv3425、Rv3429、Rv3615c、Rv3873、Rv3874、Rv3875、Rv3878、Rv3879c抗原、它们的衍生抗原表位肽、嵌合重组抗原及类似物中的至少一种；所述抗凝血物质为肝素钠和/或肝素锂；所述细胞凝集素为植物血细胞凝集素和/或刀豆凝集素；所述实验缓冲液为含有0.15mol/L的氯化钠、0.6mL/L的吐温-20、30ppm的300防腐剂、100μmol/L的乙二胺四乙酸的5mmol/L，pH7.8的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液；所述浓缩洗液为含有1.125g/L的氯化钠、0.2mL/L的吐温-20、30ppm的300防腐剂的50mmol/L，pH7.8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液；所述隔离层使用的隔离层溶液为含有0.12mol/L的氯化钠、0.38g/L的叠氮钠、10g/L的牛γ球蛋白、50g/L的牛血清白蛋白、50g/L的海藻糖、0.8g/L原生鼠IgG、0.05g/L的变性小鼠IgG、2g/L酪蛋白、37.5U/mL的肝素钠的50mmol/L，pH7.8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸。 10.如权利要求8所述的快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述刺激物为Rv3874和Rv3875的组合；测试反应杯的制备方法为：将所述链霉亲和素稀释至浓度0.1～10μg/mL，加入到空白测试反应杯中，2～8℃下孵育20～24h，洗涤；将所述生物素化γ-干扰素单克隆抗体稀释至浓度0.1～10μg/mL，加入到包被有链霉亲和素的测试反应杯中，2～8℃下孵育20～24h，洗涤；然后每个杯中加入隔离层溶液，干燥后形成隔离层以防止镧系元素标记的γ-干扰素单克隆抗体吸附到测试反应杯上，最后在隔离层上加入工作浓度为100～400ng/mL的所述镧系元素标记的γ-干扰素单克隆抗体，干燥后即得所述测试反应杯。
所属类别：	发明专利