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原文传递一种黄曲霉毒素M1的检测方法

专利名称：	一种黄曲霉毒素M1的检测方法
摘要：	本发明公开了一种检测黄曲霉毒素M1的方法。本发明提供了试剂盒在检测黄曲霉毒素M1中的应用；所述试剂盒中含有荧光标记的抗黄曲霉毒素M1的抗体、超顺磁性粒子标记的黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原和微流控芯片检测卡；微流控芯片检测卡包括底板和微流控芯片；微流控芯片上设有检测通道；检测通道由底部通道和分别位于其两端的加样通道和吸液通道连通组成，加样通道和吸液通道的开口分别为加样孔和吸液孔，底部通道固定有滤芯，滤芯上设有多个用于流通加样液的通孔。本发明所提供的检测试剂盒及检测方法，检测黄曲霉毒素M1，检测的灵敏度高、检测时间短，检测成本低，易于操作和推广。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	清华大学深圳研究生院
发明人：	马岚;吴峰;岑瑜;毛茅
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910525209.2
公开号：	CN110187118A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	张立娜
分类号：	G01N33/58(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	518055 广东省深圳市南山区西丽大学城清华园区
主权项：	1.试剂盒在如下任一应用： (d1)检测黄曲霉毒素M1； (d2)制备用于检测黄曲霉毒素M1的产品； (d3)检测待测样品中是否含有黄曲霉毒素M1； (d4)制备用于检测待测样品中是否含有黄曲霉毒素M1的产品； (d5)检测待测样品中黄曲霉毒素M1的含量； (d6)制备用于检测待测样品中黄曲霉毒素M1的含量的产品；所述试剂盒含有： 1)经荧光标记的抗黄曲霉毒素M1的抗体或其溶液； 2)经超顺磁性粒子标记的黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原或其溶液；所述黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原为黄曲霉毒素M1与载体蛋白偶联后形成的人工抗原； 3)微流控芯片检测卡；所述微流控芯片检测卡包括底板和固定在底板上的微流控芯片；所述微流控芯片上设有检测通道；所述检测通道由底部通道和分别位于其两端的加样通道和吸液通道连通组成，所述加样通道和所述吸液通道的开口分别为加样孔和吸液孔，所述底部通道固定有滤芯，所述滤芯上设有多个用于流通加样液的通孔。 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述荧光为荧光量子点、异硫氰酸荧光素、藻红蛋白或稀土荧光微球；进一步地，所述荧光量子点为CdSe/ZnS荧光量子点。和/或所述抗黄曲霉毒素M1的抗体为能够特异性结合黄曲霉毒素M1的多克隆抗体或单克隆抗体；和/或所述超顺磁性粒子为Fe3O4磁性纳米粒子经包覆SiO2并表面修饰羧基功能化基团的微球；和/或在所述试剂盒中，所述载体蛋白为BSA、OVA或KLH。 3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述滤芯上的通孔孔径小于所述超顺磁性粒子的直径；所述超顺磁性粒子的直径小于所述微流控芯片检测卡上的所述检测通道的最小内径。 4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述超顺磁性粒子的直径为100nm-100μm，优选地，为1-10μm，更优选地，为4-10μm；和/或所述滤芯的通孔孔径为0.5μm-5μm，优选地，为1-2μm。 5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于：所述试剂盒中还含有用于稀释和冲洗待测样品的样品处理液；进一步地，所述样品处理液为含体积百分比0.05％Tween20的0.02M的pH7.4的PBS溶液。 6.根据权利要求1-5中任一所述的应用，其特征在于：所述经荧光标记的抗黄曲霉毒素M1的抗体是按照包括如下步骤的方法制备得到的： (a1)用二硫苏糖醇还原所述抗黄曲霉毒素M1的抗体中的二硫键，以释放游离硫醇； (a2)将(a1)获得的含游离硫醇的抗黄曲霉素M1的抗体与脱盐的氨基功能化CdSe/ZnS荧光量子点偶联起来，即得到所述经荧光标记的抗黄曲霉毒素M1的抗体；和/或所述经超顺磁性粒子标记的黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原是按照包括如下步骤的方法制备得到的： (b1)将羧基修饰的所述超顺磁性粒子用浓度为0.1M、pH值为4.7的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液重悬，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和NHS(N-羟基丁二酰亚胺)，室温避光反应，得到活化后羧基修饰的超顺磁性粒子； (b2)取所述黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原和(b1)获得的所述活化后羧基修饰的超顺磁性粒子，混合到50mM pH8.5的硼砂缓冲液中，室温避光反应，得到所述超顺磁性粒子与所述黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原的偶联物，即为所述经超顺磁性粒子标记的黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原；和/或所述微流控芯片检测卡的方法是按照包括如下步骤的方法制备得到的： (c1)制备得到所述微流控芯片； (c2)将(c1)所得的所述微流控芯片固定到所述底板上，得到所述微流控芯片检测卡。 7.检测黄曲霉毒素M1试剂盒，为权利要求1-6任一中所述的试剂盒。 8.制备权利要求7所述的试剂盒的方法，包括如下步骤：分别制备所述经荧光标记的抗黄曲霉毒素M1的抗体、所述经超顺磁性粒子标记的黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原和所述微流控芯片检测卡；制备所述经荧光标记的抗黄曲霉毒素M1的抗体的方法如权利要求6中所述；制备所述经超顺磁性粒子标记的黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原的方法如权利要求6中所述；制备所述微流控芯片检测卡的方法如权利要求6中所述。 9.如下任一方法： (A)一种检测待测样品中黄曲霉毒素M1含量的方法，包括： (A1)绘制标准曲线：配制系列浓度的黄曲霉毒素M1的标准品溶液，将所得的若干份含有不同浓度的黄曲霉毒素M1的标准品溶液分别与权利要求7所述试剂盒中的所述样品处理液混合，再分别加入权利要求7所述试剂盒中的所述经荧光标记的抗黄曲霉毒素M1的抗体和权利要求7所述试剂盒中的所述经超顺磁性粒子标记的黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原，反应，得到反应液；将所述反应液加入到权利要求1-67所述试剂盒中的所述微流控芯片检测卡的所述加样孔中，再用所述样品处理液冲洗；检测所述微流控芯片检测卡中所述检测通道内所述滤芯前端处的荧光强度；然后根据测得的荧光强度值和黄曲霉毒素M1的标准品的浓度值绘制标准曲线，得到标准曲线方程； (A2)待测样品检测：将所述待测样品与权利要求7所述试剂盒中的所述样品处理液混合，再加入权利要求7所述试剂盒中的所述经荧光标记的抗黄曲霉毒素M1的抗体和权利要求7所述试剂盒中的所述经超顺磁性粒子标记的黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原，反应，得到反应液；将所述反应液加入到权利要求7所述试剂盒中的所述微流控芯片检测卡的所述加样孔中，再用所述样品处理液冲洗；检测所述微流控芯片检测卡中所述检测通道内所述滤芯前端处的荧光强度；然后根据(A1)所得标准曲线方程计算得到所述待测样品中黄曲霉毒素M1的含量； (B)一种检测或辅助检测待测样品中是否含有黄曲霉毒素M1的方法，包括： (B1)将待测样品与权利要求7所述试剂盒中的所述样品处理液混合，再加入权利要求7所述试剂盒中的所述经荧光标记的抗黄曲霉毒素M1的抗体和权利要求7所述试剂盒中的所述经超顺磁性粒子标记的黄曲霉毒素M1偶联蛋白抗原，反应，得到反应液；将所述反应液加入到权利要求7所述试剂盒中的所述微流控芯片检测卡的所述加样孔中，再用所述样品处理液冲洗；然后检测所述微流控芯片检测卡中所述检测通道内所述滤芯前端处的荧光强度； (B2)根据检测结果，按照如下确定所述待测样品中是否含有黄曲霉毒素M1：若(B1)测得的荧光强度不低于标准荧光强度，则所述待测样品中不含有或者候选不含有黄曲霉毒素M1；若(B1)测得的荧光强度低于所述标准荧光强度，或者经(B1)检测无荧光，则所述待测样品中含有或者候选含有黄曲霉毒素M1；所述标准荧光强度是按照包括如下步骤的方法测得的：将(B1)中所述待测样品替换为不含黄曲霉毒素M1的样品，其余操作同(B1)。 10.根据权利要求1所述的应用或权利要求9方法，其特征在于：在(A1)和(B1)中，所述反应的条件为室温反应10min；和/或所述待测样品为牛奶。
所属类别：	发明专利