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原文传递一种基于RGO-CS-Fc/Au NPs纳米复合材料结合适配体检测甲胎蛋白的方法

专利名称：	一种基于RGO-CS-Fc/Au NPs纳米复合材料结合适配体检测甲胎蛋白的方法
摘要：	一种基于RGO‑CS‑Fc/Au NPs纳米复合材料结合适配体检测甲胎蛋白的方法，采用电沉积技术以及静电吸附作用将RGO‑CS‑Fc/Au NPs修饰在丝网印刷电极表面。通过纳米技术以及分子间作用力将AFP适配体负载在RGO‑CS‑Fc/Au NPs材料表面，适配体因其不稳定的空间结构而以单链结构的形式存在复合材料表面。在电极表面中加入AFP后，AFP能够与AFP适配体特异性结合，生成稳定的空间结构，从而可以有序的排列在电极表面。通过DPV方法检测电流值，并描绘出该电流与甲胎蛋白浓度的关系曲线，实现对甲胎蛋白的定量检测。该方法操作简单、省时、费用低且具有较低的检测限。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	桂林电子科技大学
发明人：	李桂银;李文湛;周治德;梁晋涛
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910476441.1
公开号：	CN110146581A
代理机构：	桂林市华杰专利商标事务所有限责任公司
代理人：	刘梅芳
分类号：	G01N27/48(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	541004 广西壮族自治区桂林市七星区金鸡路1号
主权项：	1.一种基于RGO-CS-Fc/Au NPs纳米复合材料结合适配体作为识别探针检测甲胎蛋白的方法，按以下步骤进行：步骤1：RGO-CS-Fc材料的制备（1）RGO的制备：将GO倒入蒸馏水中，使用超声细胞破碎仪超声，使其充分溶解均匀，制成GO水溶液；取上述GO水溶液，加入抗坏血酸，使其还原GO，得RGO；（2）CS-Fc的制备：将CS加入乙酸溶液中，得壳聚糖溶液；将Fc与上述壳聚糖溶液混合，以EDC/NHS活化，搅拌得CS-Fc复合物；（3）RGO-CS-Fc复合材料的制备：取RGO悬液加入到CS-Fc溶液中，EDC/NHS活化，离心分离得RGO-CS-Fc悬浊液；步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建（1）将丝网印刷电极置于H2SO4溶液中，进行循环伏安扫描，得到活化后的丝网印刷电极；（2）将活化后的丝网印刷电极置入氯金酸溶液中，进行恒电位沉积，沉积结束后用水将电极冲洗干净，得到Au NPs/SPE电极；（3）将Au NPs/SPE电极用戊二醛浸泡，用PBS洗涤，吹干；滴加RGO-CS-Fc悬浊液孵育，PBS洗涤，晾干，得到RGO-CS-Fc/Au NPs/SPE电极；（4）取氨基化的AFP aptamer滴加到传感器界面，孵育一段时间，用PBS溶液洗涤未固定到界面的AFP适配体，滴加牛血清蛋白溶液进行封闭，得到AFP aptamer /RGO-CS-Fc/AuNPs/SPE传感界面，晾干备用；步骤3：甲胎蛋白的工作曲线绘制（1）将标准AFP溶液滴加到步骤2得到的AFP aptamer /RGO-CS-Fc/Au NPs/SPE传感界面，孵育，PBS溶液清洗，得到工作电极，晾干备用；（2）将工作电极放入PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，记录其峰电流；（3）分别对不同浓度的甲胎蛋白进行检测，绘制标准曲线，计算出该方法的最低检测限；步骤4：实际样品中AFP的检测（1）在步骤2得到的AFP aptamer /RGO-CS-Fc/Au NPs/SPE传感界面，滴加待测实际样品，孵育，用PBS溶液清洗，得到工作电极，晾干备用；（2）将工作电极放入PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，记录其峰电流；（3）根据步骤3所述标准曲线，得到所述待测实际样品中甲胎蛋白的浓度。 2.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：步骤1中所述乙酸溶液质量浓度为1%、体积为100mL。 3.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：步骤1中所述EDC/NHS浓度为10 mmol/L。 4.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：步骤2中所述将电极置于H2SO4中进行循环伏安扫描后，用纯水冲洗干净后，再将电极置于4mL 0.01% 氯金酸溶液进行恒电位沉积，最后用纯水冲洗晾干备用。 5.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：步骤2中所述用于纳米金的沉积溶液为浓度为0.01%的氯铂酸，沉积条件为-0.5 V，沉积时间120 s。 6.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：步骤2中所述BSA溶液为6μL0.5% 的BSA溶液。 7.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：步骤3和步骤4中所述电极的孵育温度为25°C，孵育时间为30分钟。 8.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：步骤3和步骤4中所述DPV扫描所用的溶液为pH值为6.0的PBS溶液。 9.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法，其特征在于：步骤3和步骤4中所述的扫描范围为-0.4V ~ 1.2V，扫描速率为0.01V/s。
所属类别：	发明专利