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原文传递抗链球菌溶血素“O”胶乳免疫比浊检测试剂盒及制备方法

专利名称：	抗链球菌溶血素“O”胶乳免疫比浊检测试剂盒及制备方法
摘要：	本发明提供一种抗链球菌溶血素“O”胶乳免疫比浊检测试剂盒及制备方法。所述试剂盒为生化分析仪上使用的液体双试剂，其中试剂R1为添加0.1％～5％w/v增敏剂，0.01％～0.5％w/v表面活性剂，0.5％～5％w/v保护剂和0.02％～0.2％w/v防腐剂的缓冲液体系，试剂R2为抗链球菌溶血素“O”胶乳试剂。本发明提供的试剂盒相较市售ASO试剂盒，具有精密度好、灵敏度高、线性范围宽、特异性强和准确度好等优点，为临床ASO相关疾病的辅助诊断提供重要依据。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中生北控生物科技股份有限公司
发明人：	张勇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910450951.1
公开号：	CN110146706A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	王文君;黄爽
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	102200 北京市昌平区科技园区超前路27号
主权项：	1.抗链球菌溶血素“O”胶乳免疫比浊检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1与R2，其中试剂R1为反应缓冲液，试剂R2为抗链球菌溶血素“O”胶乳试剂；所述试剂R1为0.02～0.2M，pH7.0～9.0的缓冲液，所述缓冲液含有0.1～1M NaCl，0.1％～5％w/v增敏剂，0.01％～0.5％w/v表面活性剂，0.5％～5％w/v保护剂和0.02％～0.2％w/v防腐剂；所述缓冲液选自硼酸、Tris、MES、HEPES、PIPES、TES、TAPSO、Bicine、MOPS中的至少一种；所述试剂R2是通过水溶性碳化二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺使溶血素“O”与羧基化聚苯乙烯胶乳微球发生共价交联制得的抗链球菌溶血素“O”胶乳试剂。 2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述羧基化聚苯乙烯胶乳微球的平均粒径大小为70～180nm，优选80～120nm。 3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述增敏剂选自PEG4000、PEG6000、PEG10000、PEG20000中的至少一种。 4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂选自Tween-20、Span-20、Triton X-100、TX-10、OP-10、ON-870、F68、Brij35、十六烷基氯化铵中的至少一种。 5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述保护剂选自BSA、蔗糖、乳糖、海藻糖、甘露醇中的至少一种。 6.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为NaN3和/或Proclin-300。 7.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述溶血素“O”为Abgree公司生产的蛋白S7017。 8.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2的制备方法如下： 1)胶乳微球的活化：向1mg/ml羧基化聚苯乙烯胶乳微球1～5ml中加入用50mM，pH6.1MES溶解的0.1～10mg水溶性碳化二亚胺和0.1～10mg N-羟基琥珀酰亚胺，活化10～60min，8000～18000rpm离心30min，弃上清，沉淀用pH7.0～8.0的50mM PBS重悬，得到1mg/ml活化的胶乳微球溶液； 2)溶血素“O”蛋白的偶联：将0.2mg溶血素“O”蛋白加入1mg/ml活化的胶乳微球溶液2ml中，室温混匀2～4h，8000～18000rpm离心30min，弃上清，沉淀用含5mg BSA的50mM PBS溶液封闭60min，搅拌混匀，8000～18000rpm离心30min，收集的沉淀保存于缓冲液中，得到浓度为0.1mg/ml溶血素“O”蛋白标记胶乳微球溶液，即为试剂R2；其中，所述缓冲液为0.02～0.2M，pH7.0～9.0的缓冲液，所述缓冲液含有0.1～1MNaCl，0.01％～0.5％w/v表面活性剂，0.5％～5％w/v保护剂和0.02％～0.2％w/v防腐剂；所述缓冲液选自硼酸、Tris、MES、HEPES、PIPES、TES、TAPSO、Bicine、MOPS中的至少一种；所述表面活性剂选自Tween-20、Span-20、Triton X-100、TX-10、OP-10、ON-870、F68、Brij35、十六烷基氯化铵中的至少一种；所述保护剂选自BSA、蔗糖、乳糖、海藻糖、甘露醇中的至少一种；所述防腐剂为NaN3和/或Proclin-300。 9.根据权利要求1-8任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1为0.05～0.1M，pH7.7～8.5的Tris缓冲液，所述缓冲液含有0.1～0.4M NaCl，0.5％～2％w/vPEG6000，0.05％～0.2％w/v Triton X-100，1％～5％w/v BSA，0.05％～0.2％w/vProclin-300。 10.根据权利要求1-9任一项所述检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)分别配制试剂R1以及用于配制试剂R2的缓冲液； (2)胶乳微球的活化：向1mg/ml羧基化聚苯乙烯胶乳微球1～5ml中加入用50mM，pH6.1MES溶解的0.1～10mg水溶性碳化二亚胺和0.1～10mg N-羟基琥珀酰亚胺，活化10～60min，8000～18000rpm离心30min，弃上清，沉淀用pH7.0～8.0的50mM PBS重悬，得到1mg/ml活化的胶乳微球溶液； (3)溶血素“O”蛋白的偶联：将0.2mg溶血素“O”蛋白加入1mg/ml活化的胶乳微球溶液2ml中，室温混匀2～4h，8000～18000rpm离心30min，弃上清，沉淀用含5mg BSA的50mM PBS溶液封闭60min，搅拌混匀，8000～18000rpm离心30min，收集的沉淀保存于缓冲液中，得到浓度为0.1mg/ml溶血素“O”蛋白标记胶乳微球溶液，即为试剂R2； (4)将试剂R1和试剂R2分装于瓶中，即得抗链球菌溶血素“O”胶乳免疫比浊检测试剂盒。
所属类别：	发明专利