详情

原文传递心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法及对cTnI的检测方法

专利名称：	心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法及对cTnI的检测方法
摘要：	心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法及其对cTnI的检测方法，本实验通过现场制备具有电化学活性的Cu‑MOF‑74与生物免疫反应相结合构建了新型的免标记型的BSA/anti‑cTnI/Cu‑MOF‑74/NH2‑rGO/GCE传感器，将传感器与目标分子（心脏标志物cTnI）进行特异性反应，得到心脏标志物抗原‑抗体结合层，从而引起电化学活性Cu‑MOF‑74层“电子转移扰动”，使输出的电化学信号产生规律性变化。该电化学传感器可用于心脏生物标志物的快速、灵敏检测，为心血管疾病患者的早发现、早诊断和早治疗提供可能。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	闽南师范大学
发明人：	高凤;汪庆祥;褚亚茹;宋娟;吴杨仪
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910434617.7
公开号：	CN110161100A
代理机构：	厦门创象知识产权代理有限公司
代理人：	吴慧敏
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	363000 福建省漳州市县前直街36号
主权项：	1.心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法，其具体步骤如下：步骤一：将1 mg NH2-rGO分散在1 mL超纯水中，超声处理10 min，得到均匀的黑色NH2-rGO分散液；步骤二：对裸玻碳电极进行预处理，将预处理好的裸玻碳电极置于2.5%重铬酸钾和10%硝酸的混合溶液中采用恒电位法对其进行氧化处理，使其表面产生-COOH等含氧活性基团，恒电位法中的电位为+1.5 V，时间为15 s；将氧化过的裸玻碳电极置于200 μL 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)/ N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化液中进行活化处理2 h，自然晾干后，取10 μL 1.0 mg/mL的NH2-rGO滴涂在电极表面并使其自然晾干，从而获得NH2-rGO/GCE电极；步骤三：Cu-MOF-74/NH2-rGO/GCE的制备：配制含20 mM Cu(NO3)2∙3H2O和0.1 M KCl混合溶液作为沉积液，并向此沉积液中通入20 min 氮气以除去溶液中的氧气，将步骤二所得NH2-rGO/GCE电极置于除氧后的沉积液中，采用恒电位法在-0.4 V条件下对其电沉积70 s，电沉积全程需向沉积液中通入氮气以免氧气进入，电沉积之后对电极进行二次水淋洗，晾干，得到Cu/NH2-rGO/GCE；配制含0.5 mM 2,5-二羟基对苯二甲酸的磷酸缓冲盐溶液，通入氮气以除去溶液中的氧气，将Cu/NH2-rGO/GCE置于2,5-二羟基对苯二甲酸的磷酸缓冲盐溶液中，采用循环伏安法在−1.0 V ～ +1.0 V扫描电位区间对其进行20个循环，之后用超纯水淋洗，最后制得Cu-MOF-74/NH2-rGO/GCE电极；步骤四：心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器的制备：将步骤三所得Cu-MOF-74/NH2-rGO/GCE置于200 μL活化液中，在活化处理2 h之后，将其浸泡在200μL含4μg/mL的anti-cTnI的免疫组化磷酸缓冲盐溶液中，浸泡时间为4 h，二次水淋洗，制得anti-cTnI/Cu-MOF-74/NH2-rGO/GCE；最后将anti-cTnI/Cu-MOF-74/NH2-rGO/GCE再在200μL 1% 的BSA溶液中浸泡2 h，二次水淋洗，最终制得BSA/anti-cTnI/Cu-MOF-74/NH2-rGO/GCE传感器，即为心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器。 2.如权利要求1所述的心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法，其特征在于：步骤二中对裸玻碳电极进行预处理的步骤为：首先用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm的Al2O3粉末依次对其进行抛光；然后用乙醇、超纯水对其各超声处理5 min；最后用N2吹干电极表面，备用。 3.如权利要求1所述的心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法，其特征在于：所述活化液为5.0×10-3 mol/L EDC和8.0×10-3 mol/L NHS混合的磷酸缓冲盐溶液。 4.心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器对cTnI的检测方法：将心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器分别浸泡在不同浓度的cTnI中50分钟，进而采用差分脉冲伏安法在pH =6.86的磷酸缓冲盐溶液中对心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器识别不同浓度的cTnI的结果进行电化学检测，差分脉冲伏安法测试参数：扫描电位为-0.4 ～ + 0.2 V，扫描速率为0.1 V/s，电位增量为0.004 V，电位幅度为0.05 V，脉冲宽度为0.05 s，脉冲周期为0.5s。 5.如权利要求4所述的心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器对cTnI的检测方法，其特征在于：所述方法中将心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器浸泡在不同浓度的cTnI时，其氧化峰电流随着cTnI浓度的增大而逐渐减小，在cTnI浓度为0.01 pg/mL到1.0 ng/mL范围内，其∆Ipa与cTnI浓度的负对数呈良好的线性关系，线性方程为∆Ipa (µA) = 5.515 -0.3649 lgCcTnI (g/mL)，R = 0.9950。 6.如权利要求5所述的心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器对cTnI的检测方法，其特征在于：上述方法cTnI的检测限是4.5 fg/mL。
所属类别：	发明专利