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原文传递一种莱菔子代谢组学分析方法

专利名称：	一种莱菔子代谢组学分析方法
摘要：	本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种莱菔子代谢组学分析方法。本发明采用液质联用技术对样品进行分析，本发明利用水、甲酸、乙腈为流动相，采用正负离子模式对样品进行检测，经液质联用分析出代谢标志物，由此可对莱菔子治疗高血压的机制进行深入探讨。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东中医药大学
发明人：	高世杰;齐冬梅;李运伦;蒋海强
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910568845.3
公开号：	CN110161162A
代理机构：	济南克雷姆专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	杨婷
分类号：	G01N30/86(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	250355 山东省济南市长清区大学路4655号
主权项：	1.一种莱菔子代谢组学分析方法，其特征在于，采用液质联用技术对样品进行测定分析，具体步骤为：色谱质谱条件的确定：使用Thermo Scientific公司的UltiMate 3000超高效液相色谱仪，T Halo-C18色谱柱柱：2.1mm×100mm，2.7μm，流动相A为水(含0.05％甲酸)，B为乙腈(含0.05％甲酸)，流速为0.30mL·min-1，柱温45℃，进样器温度为15℃，进样量为5μL；采用梯度洗脱的方式进行分离：0～1min，2％～2％B；1～3min，2％～20％B；3～4min，20％～20％B；4～7min，20％～40％B；7～9min，40％～70％B；9～15min，70％～98％B，其余为A；质谱仪为Thermo Scientific公司的四级杆-静电场轨道阱超高分辨质谱仪；采用正负离子模式对样品进行检测；正离子模式检测条件为：HESI离子源，鞘气45arb，辅助气10arb，裂解电压3.5KV，源内温度300℃，S-Lens RF Level为55，质谱采集范围为80-1000m/z，分辨率为70000；负离子模式检测条件为：HESI离子源，鞘气40arb，辅助气10arb，裂解电压为2.8KV，源内温度为320℃，S-Lens RF Level为55，质谱采集范围为80-1000m/z，分辨率为70000；代谢标志物的发现：借助Thermo Scientific公司的Compound Discoverer 2.1软件，通过p-value和fold change值进行代谢标志物的初选，再结合mzCloud match score确定代谢标志物。 2.根据权利要求1所述的一种莱菔子代谢组学分析方法，其特征在于，样品采用以下步骤获得： (1)莱菔子水煎液的制备：称取过筛后的莱菔子粉90.00g，加蒸馏水浸泡20-30min，加热至沸后保持微沸20-25min，过滤，得滤液和滤渣；将滤渣再次放入蒸馏水中，继续加热至沸后，保持微沸20-25min，过滤，得滤液和滤渣；将两次滤液合并后用容量瓶定容至200mL； (2)实验动物的选择：将20只SPF级自发性高血压大鼠适应性饲养1周后，随机分为给药组和模型组，每组10只；将每只大鼠称体重后，按10mL·kg-1的量对给药组灌服莱菔子水煎液，连续给药6周，同时模型组大鼠给予同等剂量的蒸馏水，其余饲养条件相同； (3)血清样本的收集：莱菔子水煎液连续干预6周后，分别对给药组和模型组大鼠眼眶取血，注入不抗凝EP管中，静置，离心，取上清液；将所得血清保存备用； (4)样品的处理：取备用血清，解冻，摇匀，精密吸取血清100μL，加入预冷高效液相色谱用甲醇300μL，涡旋，离心，吸取上清液，微孔滤膜过滤于液相小瓶中，作为样品保存备用。 3.根据权利要求2所述的一种莱菔子代谢组学分析方法，其特征在于，所述莱菔子粉为将莱菔子用高速粉碎机粉碎后，用中国药典3号筛过筛所得。 4.根据权利要求2所述的一种基于莱菔子代谢组学分析方法，其特征在于，步骤(3)中静置30min，4000rmp·min-1离心10min，保存温度为-80℃。 5.根据权利要求2所述的一种莱菔子代谢组学分析方法，其特征在于，步骤(4)中涡旋1min后以12000r·min-1的速度离心10min，吸取上清液，用0.22μm微孔滤膜过滤；保存温度为-20℃。 6.根据权利要求1所述的一种基于代谢组学分析方法，其特征在于，代谢标志物的发现步骤中，筛选p-value<0.05，log2(fold change)>0.59的化合物作为初选的代谢标志物。 7.根据权利要求1所述的一种基于代谢组学分析方法，其特征在于，初步确定的莱菔子水煎液治疗高血压的代谢标志物为：
所属类别：	发明专利