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原文传递一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法

专利名称：	一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法
摘要：	本发明公开了一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法，属于生物样品的检测领域。一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法，主要包括以下步骤：S1、制备黄体酮储备液和制备内标溶液；S2、血浆样品的获得；S3、标准曲线绘制；S4、血浆样品处理并进行LC‑MS/MS分析；S5、组织分布样品处理并进行LC‑MS/MS分析；本发明采用空白肝组织进行标准曲线方法学验证，并对血浆样品进行定量，检测方法用于Wistar大鼠灌胃黄体酮后药代动力学的研究；采用空白肝组织替代其他空白组织进行标准曲线方法学验证，并对大鼠心、肝、脾、肺、肾等各组织样品中的药物浓度进行定量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	国科卓越(北京)医药科技研究有限公司
发明人：	李敬来;冯倩倩;罗欢;杨晓玲;孔爱英
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910437897.7
公开号：	CN110208442A
代理机构：	北京德崇智捷知识产权代理有限公司
代理人：	董柏雷
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100176 北京市大兴区经济技术开发区中和街18号1号楼104室
主权项：	1.一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法，其特征在于，主要包括以下步骤： S1、制备黄体酮储备液和制备内标溶液； S2、血浆样品和组织样品的获得； S3、标准曲线绘制取黄体酮标准品储备液，用甲醇稀释成系列浓度的黄体酮标准品工作溶液，分别取各浓度工作溶液50μl于50μl空白肝匀浆中，使得组织匀浆中黄体酮终浓度分别是：0.4ng/mL，2ng/mL，8ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，分别取各浓度的组织匀浆50μL，分别加入10μL步骤S1中的内标溶液和190μL甲醇，涡旋处理55-65s，离心处理10min，取100μL上清液，进行LC-MS/MS分析。以黄体酮终浓度为横坐标，待测物与内标峰面积比之为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，所得直线回归方程即为标准曲线； S4、血浆样品处理并进行LC-MS/MS分析； S5、组织分布样品处理并进行LC-MS/MS分析； S6、根据S4和S5的LC-MS/MS分析结果结合步骤S3中的标准曲线，分别对步骤S4中的血浆样品和S5中的心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸、胃、小肠、大肠、脂肪、肌肉各组织中的黄体酮进行定量。 2.根据权利要求1所述的一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法，其特征在于，在步骤S1中：制备黄体酮储备液：精密称定标准品黄体酮，用甲醇配制黄体酮标准品储备液浓度为1mg/mL。 3.根据权利要求1所述的一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法，其特征在于，在步骤S1中：制备内标溶液：精密称定内标醋酸甲地孕酮，用乙腈配制内标储备液浓度为1mg/mL，精密量取储备液，用乙腈逐步稀释成浓度为100ng/ml的内标溶液备用。 4.根据权利要求1所述的一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法，其特征在于，在步骤S4中：血浆样品处理：取步骤S2中wistar大鼠血浆50μL，加入50μL水，分别加入10μL步骤S1中的内标溶液，30μL三氯甲烷，210μL乙腈，充分振荡后，离心处理10min，取100μL上清液，加10μL浓度为11mol/L的氢氧化钠溶液，然后进行涡旋处理28-32s，离心处理10min，取50L上清液，进行LC-MS/MS分析。 5.根据权利要求1所述的一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法，其特征在于，在步骤S5中：组织分布样品处理：分别取步骤S2中wistar大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸、胃、小肠、大肠、脂肪、肌肉各组织，称取各组织0.2～0.5mg，于匀浆器中加甲醇/水比例为1：4的匀浆液制成10％的组织匀浆；取50μL组织匀浆，分别加入10μL步骤S1中的内标溶液和190μL甲醇，涡旋处理55-65s，离心处理10min，取100μL上清液，进行LC-MS/MS分析。 6.根据权利要求1-5任一项所述的一种检测生物样品中黄体酮的药物浓度的方法，其特征在于，在步骤S2中，血浆样品的获得： wistar大鼠5只，给药前不禁食；灌胃黄体酮黄体酮软胶囊，给药剂量400mg/粒；分别于给药后5min、15min、30min、1h、2h、6h、8h、24h由静脉窦采血0.28-0.32ml，离心处理10min，分离血浆50μL，转移到1.5ml的EP管中，置－70℃冰箱存放待测；组织样品的获得： wistar大鼠30只，给药前不禁食；灌胃黄体酮黄体酮软胶囊，给药剂量400mg/粒；分别于给药后20min、1h、2h、6h、18h二氧化碳安乐死，立即解剖采集心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸、胃、小肠、大肠、脂肪、肌肉；收集部分全血离心后，分离血浆，脏器用生理盐水冲洗干净，并用滤纸吸去水份，吸干后贴好标签，-70℃冰箱保存待测。
所属类别：	发明专利